[发明专利]蛋白酶变体及组合物

说明书

技术领域

本发明涉及新的适用于配制洗涤组合物并在洗涤剂中显示改良的洗涤性能的突变蛋白酶或酶变体、含有该酶的清洁和洗涤组合物、插入到合适的宿主细胞或生物体中时编码表达该酶的突变基因；以及已被突变基因转化并能够表达该酶变体的宿主细胞。

发明背景

在洗涤剂工业中，酶在洗涤配方中已经被应用超过30年。用于这些制剂的酶包括：蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、纤维素酶以及其它酶，或者它们的混合物。商业上最重要的酶是蛋白酶。

数目不断增加的商业用途的蛋白酶是天然存在的野生型蛋白酶的蛋白质工程变体，如DURAZYM^(Novo Nordisk A/S)、RELASE^(Novo Nordisk A/S)、MAXAPEM^(Gist-Brocades N.V.)、PURAFECT^(Genencor国际有限公司)。

还有许多蛋白酶变体在本领域中已有描述，如EP 130756(GENENTECH)(相应于美国再颁专利34,606(GENENCOR))；EP214435(HENKEL)；WO 87/04461(AMGEN)；WO 87/05050(GENEX)；EP 260105(GENENCOR)；Thomas，Russell和Fersht(1985)自然(Nature)318 375-376；Thomas，Russell和Fersht(1987)分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)193 803-813；Russell和Fersht(1987)自然328496-500(1987)；WO 88/08028(Genex)；WO 88/08033(AMGEN)；WO95/27049(SOLVAY S.A.)；WO 95/30011(PROCTER & GAMBLE公司)；WO 95/30010(PROCTER & GAMBLE公司)；WO95/29979(PROCTER & GAMBLE公司)；US 5.543.302(SOLVAYS.A.)；EP 251 446(GENENCOR)；WO 89/06279(Novo Nordisk A/S)；WO 91/00345(Novo Nordisk A/S)；EP 525 610 A1(SOLVAY)；WO94/02618(GIST-BROCADES N.V.)；和WO 96/34946(Novo NordiskA/S)。

然而，尽管已经描述了许多有用的蛋白酶变体，许多工业用途仍然需要新的改良的蛋白酶变体。

因此，本发明的目的是提供改良的蛋白质工程化蛋白酶变体，尤其是用于洗涤剂工业。

发明概述

本发明深入研究了SAVINASE^的残基V95、G97和A98的许多种可能的组合，并且鉴定了具有增强的洗涤性能的一些变体。

进一步的细节参阅本文实施例(见下文)。

相应地，本发明第一方面涉及在洗涤剂中具有改良的洗涤性能的枯草杆菌酶(subtilase)蛋白酶变体，该变体在位点95、97和/或98具有修饰。

根据本发明的枯草杆菌酶变体优选地在两个位点97和98均有修饰，更优选地在所有三个位点95、97和98都有修饰。

本发明第二方面涉及在洗涤剂中具有改良的洗涤性能的枯草杆菌酶变体，其含有至少一种选自下组的修饰：

    95T+97T+98E

    97E+98V；或

在上述任何变体中含有一个或多个保守修饰的变体(例如97E(酸性氨基酸)+98V变体的保守修饰包括如97D(酸性氨基酸)+98V的变体)。

本发明第三方面涉及编码本发明枯草杆菌酶变体的分离DNA序列。

本发明第四方面涉及含有编码本发明枯草杆菌酶变体的分离DNA序列的表达载体。

本发明第五方面涉及转化了第四方面的表达载体的微生物宿主细胞。

本发明还涉及本发明的枯草杆菌蛋白酶的生产方法，包括将根据第四方面的表达载体插入到合适的微生物宿主中，培养宿主以表达需要的枯草杆菌酶，并回收酶产品。

本发明还涉及含有本发明枯草杆菌酶变体的组合物。

最后本发明涉及突变酶在许多工业相关应用中的用途，特别是在清洁组合物中的用途，本发明还涉及含有突变酶的清洁组合物，尤其是含有突变枯草杆菌蛋白酶的洗涤组合物。

定义

在进一步详细论述本发明之前，先定义下列术语。

氨基酸的命名