[发明专利]出生前诊断法

说明书

本发明涉及诊断方法，尤其是出生前诊断法和这些方法中所使用的试剂。

在全世界，在医院中广泛进行出生前诊断。现存的用于染色体疾病，包括唐氏综合症，以及单基因缺陷，包括囊性纤维化的方法，如胎儿、肝脏或绒毛膜活检极具侵害性，并且带有对于胎儿为不得不考虑的危险以及对于母亲为小的危险。

例如羊膜穿刺术包括将一根针插入子宫以从胚胎组织或体液中收集细胞。可检测唐氏综合症的该试验带有估测为1％的流产危险。

胎儿治疗是在其很早的阶段，对于广范围的疾病的很早试验的可能性将毫无疑问地大大加快该领域的研究。目前已改进了胎儿手术技术，使得对一些遗传疾病，如脊柱二裂和腭裂的胎儿手术极为可能。此外，只要可足够早地进行检测，对于其它疾病，例如21-羟基化酶(用地塞米松治疗)和羟化全酶合成酶(用生物素治疗)缺乏症，目前可获得相对简单有效的胎儿治疗。

因此，出生前诊断的相对无侵害性的方法为一种具有吸引力的对极具侵害性的现存的方法的替代。基于母体静脉穿刺术的方法应使得较早期的诊断可更广泛地在开始三个月进行，增加父母和产科医生的选择(因为遗传疾病可被更早并更安全地检测)，并允许最终开发特异性的胎儿诊断。

回收来自母体循环的胎儿细胞的可能性已引起作为一种诊断胎儿异常的可能的对胎儿无侵害性的方法的普遍兴趣(Simpon和Elias(1993)，美国医学协会杂志，270，2357-2361)。早期的兴趣针对滋养层检测系统，但通过流式细胞术分离那些细胞已不可靠，因为母体的淋巴细胞看来吸收由滋养层细胞释放的蛋白(Mueller等(1990)柳叶刀336，197-200；Covone等(1984)柳叶刀1310月版，841-843)。最近，注意力集中在开发分离用于细胞遗传学分析的胎儿血细胞，尤其是具核胎儿红细胞的方法，因为它们的数目超过母体循环中的胎儿淋巴细胞的数目。已描述了母体血液中的胎儿红细胞的确定，即在男性胎儿中用Y着丝粒探针来确定胎儿细胞或Y特异性DNA序列的扩增(Price等(1991)美国产科学与妇科学杂志，165，1731-1735；Zheng等(1993)医学遗传学杂志30，1051-1056；Hamada等(1993)人类遗传学91，427-432；Cheung等(1996)自然遗传学14，264-268；和Williamson(1996)自然遗传学14，239-249)或在三体生物情况下的核型鉴定(例如参见Bianchi等(1992)人类遗传学90，368-370)。

Hume等(1995)早期人类发育42，85-95表明微粒体葡萄糖-6-磷酸酶蛋白存在于人胚和胎儿红细胞中。

Pazouki等(1996)Acta histochem.(Jena)98，29-37设法使用结合利用人胎儿血红蛋白抗体的免疫细胞化学和使用X和Y染色体探针的原位杂交方法来鉴定胎儿具核红细胞。

Hume等(1996)血液87，762-770描述了内质网蛋白在人胚胎和胎儿红细胞前体中的表达。

Wachtel等(1991)人类繁殖6，1466-1469描述了使用PCR来鉴定通过使用运铁蛋白受体抗体和血型糖蛋白A抗体分选的细胞分离的母体细胞中的Y特异性DNA序列。

yeoh等(1991)出生前诊断11，117-123描述了通过胎儿特异性的单拷贝基因的酶促扩增对母体循环中的胎儿细胞的检测。

Holzgreve等(1992)生殖医学杂志37，410-418表明仅仅运铁蛋白受体抗原不足以富集胎儿具核红细胞，并指出该技术的可重复性和可靠性仍然有限，主要由于缺乏非常特异性的细胞标记。

Zheng等(1993)医学遗传学杂志30，1051-1056描述了通过使用特异于CD45和CD32的小鼠单克隆抗体从母体血液中排除白细胞来使用磁激活细胞分选仪(MACS)以富集胎儿具核红细胞。文章指出甚至在避免通过间期荧光原位杂交(FISH)的对胎儿细胞的准确分析的MACS富集后，仍存在显著的母体污染。

Tomoda(1964)自然202，910-911描述了通过免疫荧光染色证实胎儿红细胞。

需要鉴定母体血液中的胎儿细胞以进行出生前诊断的改进方法。