[发明专利]3型人副流感病毒的感染性克隆

权利要求书

1.一个重组HPIV克隆，该克隆包含：

a.编码人副流感病毒正义反基因组的核苷酸序列；和

b.与所述核苷酸序列操作性相连的RNA聚合酶启动子。

2.根据权利要求1所述的克隆，其中核苷酸序列编码HPIV-3的反基因组。

3.根据权利要求2所述的克隆，其中所述克隆还包含位于所述反基因组编码序列下游的核酶序列。

4.根据权利要求2所述的克隆，其中RNA聚合酶启动子是T7 RNA聚合酶启动子。

5.根据权利要求3所述的克隆，其中核酶是反基因组核酶。

6.根据权利要求3所述的克隆，它还进一步包含在核酶序列下游的RNA聚合酶终止子。

7.根据权利要求2所述的克隆，其中核苷酸序列编码修饰的HPIV-3反基因组。

8.根据权利要求2所述的克隆，其中具有质粒特征的克隆保藏在美国典型培养物保藏中心，保藏号为＿。

9.根据权利要求7所述的克隆，其中HPIV-3反基因组编码序列包含的突变选自一个或多个核苷酸的替代、3至12个核苷酸的缺失、以及3至12个核苷酸的增加。

10.一种制备重组人副流感病毒的方法，该方法包括：

a.提供一个重组体系统，该系统包含：

i.一个HPIV克隆，该克隆包含编码人副流感病毒正义反基因组的核苷酸序列；

ii.一个支持克隆，该克隆包含编码人副流感病毒L蛋白的核苷酸序列；和

iii.一个支持克隆，该克隆包含编码人副流感病毒P蛋白的核苷酸序列，

其中编码P蛋白和L蛋白的核苷酸序列可以在同一支持克隆中或在不同的支持克隆中；

b.将步骤(a)的重组系统导入宿主细胞；

c.培养步骤(b)的宿主细胞足够长时间，以转染宿主细胞并形成重组人副流感病毒；和

d.从转染的宿主细胞培养物回收重组人副流感病毒。

11.根据权利要求11所述的方法，其中HPIV克隆的反基因组编码序列与RNA聚合酶启动子操作性相连；

其中支持克隆的P蛋白编码序列与RNA聚合酶启动子操作性相连；

其中支持克隆的L蛋白编码序列与RNA聚合酶启动子操作性相连；和

其中宿主细胞包含对应于所述HPIV克隆和所述支持克隆的RNA聚合酶启动子的RNA聚合酶。

12.根据权利要求11所述的方法，其中用能在重组系统导入宿主细胞之前或在与其结合时表达RNA聚合酶的病毒重组体来感染宿主细胞。

13.一种用来生产重组人副流感病毒的宿主细胞，所述宿主细胞包含：

a.一个HPIV克隆，该克隆包含编码人副流感病毒正义反基因组的核苷酸序列；

b.一个支持克隆，该克隆包含编码人副流感病毒L蛋白的核苷酸序列；和

c.一个支持克隆，该克隆包含编码人副流感病毒P蛋白的核苷酸序列；

其中编码P蛋白和L蛋白的核苷酸序列可以在同一支持克隆中，或在不同的支持克隆中。

14.根据权利要求13所述的宿主细胞，它还包含一个支持克隆，该克隆包含编码人副流感病毒NP蛋白的核苷酸序列。

15.根据权利要求13所述的宿主细胞，其中HPIV克隆包含编码HPIV-3反基因组的核苷酸序列。

16.根据权利要求15所述的宿主细胞，其中HPIV-3反基因组编码序列包含定点突变。

17.根据权利要求14所述的宿主细胞，其中HPIV-3克隆还包含的RNA聚合酶启动子与HPIV-3反基因组序列操作性相连，且其中各个支持克隆包含的RNA聚合酶启动子与所述支持克隆的HPIV-3蛋白编码序列操作性相连。