[发明专利]一种无糖箱式植物组织的培养方法

说明书

本发明涉及一种植物组织的培养技术，尤其是涉及一种无糖培养技术。

植物组织的培养技术，从本世纪30年代开始研究，已被广泛地应用于植物体的快速繁殖、脱毒和种质资源的保存，从而促进了生物育种技术的飞跃发展。长期以来传统的植物组织培养方法，是以糖作为植物体的碳源，并补充相应的有机物质。常规的方法存在着培养过程中污染率高，试管苗生根率低，过渡苗成活率低，生产成本高等缺陷。

现有的无糖组织培养技术(参考文献：1．Kozait,Fujiwarak,Hagashim.Collected papers on Environmaental Control in MicropropagationVolumel.JoPan:Chiba Vniversity press,1991；2．肖玉兰等。非洲菊无糖组织培养技术的应用研究。园艺学报，1998,25(4))是采用瓶子作培养容器，具有污染率低，植株健壮，过渡苗成活率高的优点。但瓶子由于空间太小，气体循环不畅，即使补充了CO₂，也只有通过封口膜上的透气孔才能进入瓶内供植株吸收，CO₂的供给量仍然不够，植株生长速度缓慢，且操作困难，成本较高。

本发明的目的是消除现有技术的缺陷，提供一种用培养箱代替瓶子作培养容器，采用无糖培养基，适当光照和通入CO₂的培养方法，可有效地克服现有技术的上述问题，操作简便，能促进植株快速生长，进一步降低生产成本，提高经济效益。

本发明提供的无糖箱式植物组织培养方法包括下列步骤：

一、制作培养箱：采用有机玻璃制作培养箱，有机玻璃的厚度可为3～5毫米，箱体的尺寸：长×高×宽=500～1000毫米×200～250毫米×500毫米。

二、培养环境的调控：给培养箱配置二氧化碳通气系统，光照系统，温控系统和湿控系统，便于调节控制培养条件。

三、配制培养基：

1、配制培养液：

①本发明对现有技术中的MS培养液作了重要的改进，采用本发明特别配制

  的无糖MS培养液，即配方中不添加糖、有机物和维生素，保留了其它成份，无糖MS培养液的配方(单位：毫克/升)为：

NH₄NO₃         1650

KNO₃            1900

KH₂PO₄         170

MgSO₄·7H₂O    370

CaCl·2H₂O      440

MnSO₄·H₂O     22.3

ZnSO₄·7H₂O    8.6

H₃BO₃          6.2

KI                0.83

NaMoO₄·2H₂O   0.25

CuSO₄·5H₂O    0.025

FeSO₄·7H₂O    27.8

Na₂·EDTA       37.3

②本发明以无糖培养液为基础配制增殖培养液，其配方(单位：毫克/升)为：MS(不加糖、有机物和维生素)+(0～0.5)6-苄基氨基嘌呤

③本发明以无糖培养液为基础配制生根培养液，其配方为(单位：毫克/升)MS(不加糖、有机物和维生素)+(0～0.1)萘乙酸+(0～5000)活性碳。

2、培养基基质种类：根据所培养植物的生物学特性，可分别选择下列物质作为基质：①琼脂②珍珠岩③砂④蛭石；

3、培养基的制作程序：

①按配方将培养液配制好；

②如选择琼脂作为培养基质，可将琼脂溶解后加入培养液，经消毒后，放入培养箱内待用；

③如选择珍珠岩或砂或蛭石作基质时，则需要分别消毒，再把培养液加入基质中待用。

四、消毒：

1、培养室消毒：称量6克高锰酸钾放入一个容器内，再加10毫升甲醛进行熏蒸，紫外灯照射；