[发明专利]表达可被蛋白酶激活的活性物质的核酸构建体和其制备方法及用途

权利要求书

1.一种表达活性物质的核酸构建体，所说的活性物质被从哺乳动物细胞释放的酶激活，其中所说的构建体包括下列组分：

a)至少一个启动子元件，

b)至少一种编码活性化合物(蛋白质B)的DNA序列，

c)至少一种编码一种氨基酸序列(部分结构C)的DNA序列，所说的氨基酸序列可以被从哺乳动物细胞释放的酶特异性地切割，和

d)至少一种编码一种肽或蛋白质(部分结构D)的DNA序列，所说的肽或蛋白质利用可切割的氨基酸序列(部分结构C)连接到活性化合物(蛋白质B)上并抑制活性化合物(蛋白质B)的活性。

2.权利要求1所要求的核酸构建体，其中所说的酶是蛋白酶。

3.权利要求1或2所要求的核酸构建体，其中所说的酶是纤溶酶原激活物、组织蛋白酶或基质金属蛋白酶。

4.权利要求1到3任一项所要求的核酸构建体，其中所说的哺乳动物细胞是肿瘤细胞、白血病细胞、内皮细胞、巨噬细胞、淋巴细胞、肌肉细胞、上皮细胞、神经胶质细胞、滑液细胞或病毒-感染细胞。

5.权利要求1到4任一项所要求的核酸构建体，其中所说的核酸构建体通过添加组分b’)延长，所说的b’)组分编码配基(部分结构B’)，该配基使活性化合物(蛋白质B)结合到靶结构上。

6.权利要求1到5任一项所要求的核酸构建体，其中所说的蛋白质B和部分结构D是蛋白质活性化合物的天然前体的部分，天然切割序列已由部分结构C代替，所述天然切割序列连接部分结构B和D。

7.权利要求1到6任一项所要求的核酸构建体，其中所说的部分结构D是蛋白质活性化合物的天然前体的部分结构。

8.权利要求1到7任一项所要求的核酸构建体，其中其插入到质粒或病毒载体中。

9.权利要求1到8任一项所要求的核酸构建体，其中组分a)是启动子序列，其可以被非特异性地、细胞-特异性地、病毒-特异性地、代谢地、细胞周期-特异性地激活和/或可以被四环素激活。

10.权利要求1到9任一项所要求的核酸构建体，其中组分a)是至少两种相同的或不同的启动子序列的组合体。

11.权利要求9或10任一项所要求的核酸构建体，其中组分a)优选地在以下细胞中激活：在内皮细胞中、在靠近激活的内皮细胞的细胞中、在肌肉细胞中、在白血病细胞中、在肿瘤细胞中、在神经胶质细胞中、在淋巴细胞中，在巨噬细胞中和/或在滑液细胞中。

12.权利要求1到11任一项所要求的核酸构建体，其中所说的活性化合物(蛋白质B)激活或抑制生物激活级联和/或是这一级联的活性组分，优选地激活或抑制凝固系统，激活血纤维蛋白溶解，激活补体系统和/或激活激肽系统；或是将药理学物质的非活性前体转化成为活性物质的酶；或自身是一种药理学上的活性物质。

13.权利要求12所要求的核酸构建体，其中所说的活性化合物(蛋白质B)是选自凝血酶、因子Va、因子VIIa、因子IXa、因子Xa、TF凝固-活性片段或因子XIIa的凝固因子；在Arg-Thr切割位点(327/328位氨基酸)区中突变的凝血酶；选自尿激酶、tPA或其功能性杂合体的纤维蛋白溶解蛋白质；选自CVF、C3b或其功能性切割产物的补体因子；选自蛋白质C、C-1S抑制剂、αl-抗胰蛋白酶、水蛭素、AT-III、TFPI、PAI-1、PAI-2或PAI-3的抗血栓形成蛋白质；激肽释放酶；细胞静止的细胞毒性的或引起炎症的蛋白质；抗血管生成蛋白质；免疫调节蛋白质；抗炎蛋白质；减轻对神经系统损坏的蛋白质；抑制或中和TNFα的神经毒性作用的蛋白质；血管生成-刺激蛋白质；减压蛋白质；抗病毒蛋白质；细胞因子；干扰素；肿瘤坏死因子；制瘤素M或LIF；细胞因子受体；胞外部的细胞因子受体的部分；细胞因子拮抗剂；生长因子；生长因子受体；胞外部的生长因子受体的部分；趋化因子；血管抑制蛋白；血小板因子4；TIMP-1、TIMP-2或TIMP-3；硝基还原酶；β-葡萄糖醛酸酶；羧肽酶；β-内酰胺酶；胞嘧啶脱氨酶；过氧化氢酶；过氧化物酶；磷酸酶；氧化酶；激肽释放酶或内皮细胞氧化氮合酶。