[发明专利]方法及其所用的新化合物

说明书

本发明涉及一类新的化合物及其在医药上的应用。尤其是，本发明提供了新的大分子，它们的制备方法，其药物学配制品及其作为抗流感药剂的应用。本发明还提供了一种新的用于检测所有类型的A型和B型流感病毒的诊断方法。发明背景

甲型和乙型流感病毒是急性呼吸道疾病的主要致病源，仅在美国每年就导致估计约3-5千万例感染。甲型流感曾导致大型的流行疫情，如1919年致死上百万人的“西班牙流感”。流感产生难以控制的疾病，导致显著的发病率，并且由于二次感染在老年和虚弱的病人中死亡率增大。疫苗由于抗原漂变而不断的过时，因而免疫在预防感染中只有约70％的效率。由官方管理部门确认的治疗流感的药物只有金刚烷胺和金刚乙胺，它们在抗乙型流感上无效，并且已知有严重的副作用。

许多病毒性和细菌型感染会产生与流感类似的症候。对呼吸道病毒的快速鉴定可使得医生在疾病早期就能采用最为适当的治疗。例如，早期而准确的诊断可以确定抗菌治疗方法和对儿童和老人的住院治疗。

对临床材料中的病毒鉴定的实验室试验已经广为应用，并已有各种不同的检测方法。Marcel Dekker 1992年在教科书“病毒感染的实验室诊断”中概括讨论了对许多种病毒所使用的检测方法，其中也包括流感病毒。

许多测试可以诊断甲型和乙型流感病毒。鉴定流感病毒的传统方法有利用细胞培养，它具有高灵敏度和特异性。但不幸地是，细胞培养，分离和鉴定流感病毒所需要的时间要2至10天，因而在指导医生做出准确治疗上没有实际意义。因为流感病毒感染通常是自我限制的，所以诊断必须快速才能使治疗有效。

另外，对于细胞培养法检测流感，最近已有一些特异针对甲型流感的快速直接测试。单克隆免疫荧光测验(IFA)已有报道(Spada,B.等，病毒学方法，1991 33 305)，并且至少已有一种快速酶免疫测验(EIA)(Ryan-Poirier,K.A.等，临床微生物学杂志，1992 30 1072)。一些对这些快速检测甲型流感的方法的比较已有报道；例如见Leonardi,G.P.等，(临床微生物学杂志，1994 32 70)建议与培养分离一起进行直接样本测试，从而可以鉴定病毒及时确定治疗和控制感染的方法，并监测社会中流行的流感病毒株的抗原结构。

IFA方法据报道费工费力并且要求相当的技术技能，得出的结果常常难以解释。另一方面，EIA(Directigen FLU-A；Becton Dickinson微生物系统)方法会给出大量的假阳性结果，且该测试被建议只用于实验中，作为直接免疫荧光测试(Waner,J.L.等，临床微生物杂志，1991 29 479)的补充或替代。

现有的快速流感检测除了上述的问题之外，这些方法还存在其他的基本缺陷。首先，已有的检测中没有一种能够检测乙型流感。其次，如果一个快速免疫检测方法基于使用一种甲型流感蛋白的抗体，那么在对该抗原蛋白结构经过漂变后的新型病毒株检测时将会产生严重的问题。甲型流感病毒正是闻名于它嗜好这种的变化。

其他类型的流感病毒的快速检测在一系列专利说明书中已有描述(例如参见Liav,A等，PCT专利申请号92/12256)。该方法涉及流感神经氨酸酶的产色底物的应用。就是说，该检测基于观察一种颜色，此颜色是在流感神经氨酸酶切断一个特异的唾液酸-染料的缀合分子时形成的。该技术看来只能提供有限的特异性，因为它不能够方便的区分病毒的神经氨酸酶和该酶的其他形式，尤其是细菌的神经氨酸酶。该方法也由于病毒神经氨酸酶相对慢的活性而只具有较低的灵敏度。

甲型和乙型流感具有两种主要的表面糖蛋白，红细胞凝聚素(HA)和神经氨酸酶(NA)，它们都是感染所必需的。据信，HA对病毒附着细胞是必需的，而NA对于病毒从细胞表面释放是必需的。在每个病毒颗粒的表面典型地拥有约600个HA三聚体和大约50个拷贝的NA四聚体。因此HA和NA在寻找抗流感病毒药物中都是引人注意的潜在的目标，然而至今作用于任何这些位点的抗流感药物也没有在临床上应用。

流感病毒的血细胞凝聚素结合细胞表面受体上的含有唾液酸的糖蛋白和糖脂，从而起始病毒附着细胞和后续的感染过程。病毒颗粒附着细胞膜的结合强度可能基于多个拷贝的流感HA与细胞表面多个唾液酸基团的相互作用。