[发明专利]通过连接经编码的衔接子进行测序

权利要求书

1.测定多核苷酸末端之核苷酸序列的方法，所述方法包括步骤：

将一个或多个经编码的衔接子与多核苷酸的末端连接，每个经编码的衔接子具有选自最少交叉杂交套寡核苷酸的寡核苷酸标记物和与多核苷酸部分链互补的突出链；和

通过将标记物互补物与连接于多核苷酸末端的一个或多个经编码的衔接子的各个寡核苷酸标记物特异性杂交来鉴定多核苷酸链中所述部分中每一个的一个或多个核苷酸。

2.权利要求1的方法，其中所述连接步骤包括将多个不同的经编码的衔接子与所述多核苷酸的所述末端连接，以使多个不同的经编码的衔接子的所述突出链与所述多核苷酸所述链的多个不同部分互补，以使所述不同的经编码的衔接子与所述链的不同部分之间有一一对应关系。

3.权利要求2的方法，其中所述多核苷酸所述链的所述不同部分是邻接的。

4.权利要求1至3中任一项的方法，其中所述经编码的衔接子的所述突出链含有2-6个核苷酸，其中所述鉴定步骤包括将所述标记物互补物与所述寡核苷酸标记物特异性杂交，以使所述多核苷酸的所述部分中的每个核苷酸都能被依次测定。

5.权利要求1至4中任一项的方法，其中所述鉴定步骤进一步包括提供与所述多核苷酸的所述部分中需被鉴定的核苷酸数目相等的多套标记物互补物。

6.权利要求5的方法，其中所述鉴定步骤进一步包括提供各个所述套中的所述标记物互补物，所述标记物互补物能通过由产生荧光信号的组成成分产生的信号显示预定核苷酸的存在，针对各种核苷酸有不同的产生荧光信号的组成成分。

7.权利要求1至6中任一项的方法，其中所述经编码的衔接子的所述寡核苷酸标记物是单链，所述寡核苷酸标记物的所述标记物互补物是单链，以通过Watson-Crick碱基配对在寡核苷酸标记物及其各自的标记物互补物之间进行特异性杂交。

8.权利要求7的方法，其中所述经编码的衔接子具有下式：

    5’-p(N)_n(N)_r(N)_s(N)_q(N)_t-3’

          z(N’)_r(N’)_s(N’)_q-5’

或

          p(N)_r(N)_s(N)_q(N)_t-3’

    3’-z(N)_n(N’)_r(N’)_s(N’)_q-5’

其中N是核苷酸，N’是其互补物，p是磷酸基团，z是3’羟基或3’封闭基团，n是2至6，并包括2和6的整数，r是0至18，并包括0和18的整数，每当经编码的衔接子具有核酸酶识别位点时，s是4至6，并包括4和6的整数，当没有核酸酶识别位点时，s是0，q是大于或等于0的整数，t是大于或等于8的整数。

9.权利要求8的方法，其中r是0至12，并包括0和12的整数，t是8至20，并包括8和20的整数，z是磷酸基团。

10.权利要求1至6中任一项的方法，其中所述经编码的衔接子的所述寡核苷酸标记物是双链，而所述寡核苷酸标记物的所述标记物互补物是单链，以通过Hoogsteen或反向Hoogsteen三螺旋的形成在寡核苷酸标记物及其各自的标记物互补物之间进行特异性杂交。