[发明专利]幼儿胃肠安制剂及其生产工艺

权利要求书

1、一种幼儿胃肠安制剂，其特征在于：该幼儿胃肠安制剂是用弱毒化的轮状病毒抗原，给动物连续免疫，使其产生HRV抗体，并通过分离纯化得到的HRV抗体，并配合一种或一种以上的双歧杆菌所制成的制剂。

2、根据权利要求1所述的幼儿胃肠安制剂，其特征在于：所述轮状病毒抗原是将轮状病毒用常规的物理或化学的方法进行弱毒化，并不破坏其抗原决定簇而制成的抗原。

3、根据权利要求1所述的幼儿胃肠安制剂，其特征在于：所述用于制备HRV抗体的动物包括有母鸡，孕妊中的牛、马、羊及猪，所述HRV抗体是从产生HRV抗体的鸡蛋、或牛、马、羊、猪的泌乳中分离纯化得到的，该HRV抗体在该制剂中的配合量为10mg-2000mg/一次服用量。

4、根据权利要求3所述的幼儿胃肠安制剂，其特征在于：所述的双歧杆菌包括有婴儿双歧杆菌，短双歧杆菌、长双歧杆菌、两歧双歧杆菌，其在该制剂中的配合量为0.1亿个-4亿个活菌/一次服用量。

5、根据权利要求1或4所述的幼儿胃肠安制剂，其特征在于：该幼儿胃肠安制剂还包括有一种或一种以上的其它肠道有益菌，该肠道有益菌包括有酪酸梭菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌，其在该制剂中的配合量为0.1亿个-4亿个活菌/一次服用量。

6、根据权利要求5所述的幼儿胃肠安制剂，其特征在于：该幼儿胃肠安制剂还配合有双歧因子、维生素和微量元素。

7、制做权利要求1的幼儿胃肠安制剂的一种方法，其特征在于：所述幼儿胃肠安制剂是通过下述步骤制成的：

(一)、从免疫的蛋黄中纯化HRV抗体

(1)给半年鸡龄的母鸡连续免疫3次，所用的抗原是经过常规方法弱毒化处理的HRV血清型1、血清型2、血清型3和血清型4组成，每次注射量为0.2ml，每毫升含4×10⁷个病毒，每隔3周注射一次，

(2)将上述经免疫处理的鸡所产出的蛋中的蛋黄，用生理盐水等倍(体积比)稀释后，与2倍(体积比)的浓度为0.15％的卡拉胶溶液充分混和，并在室温下静置30分钟，

(3)将上述液体用10000g，离心15分钟，然后去除沉淀，取上清液，用硅藻土过滤，再用3NHCl调PH值为8.0，

(4)将上述液体上DEAE-Sephacel离子交换柱，再用20mM、PH为8.0的磷酸缓冲液洗净，然后用200mM、PH为8.0的磷酸缓冲液洗脱，经280nm检测，收集蛋白峰，向收集液中加入终浓度为15％的硫酸钠，充分混匀后，在室温条件下静置30分钟，

(5)将上述液体用10000g，离心15分钟，取沉淀物再溶于100mM、PH为8.0磷酸溶液中，再对10mM磷酸缓冲液透析，将透析液冷冻干燥得蛋黄抗体冻干粉，

(二)、制备冻干菌粉

(1)用蒸馏水配制发酵培养基，该发酵培养基含有胰蛋白胨、酵母抽取物、牛肉浸膏中的一种或几种，以及低聚果糖、葡萄糖，该发酵培养基的组成为(其含量为重量百分数)：胰蛋白胨0.5％-4％，酵母抽提物0.5％-4％，牛肉浸膏0.5％-4％，低聚果糖0.5％-4％，葡萄糖0.5％-4％，

(2)将培养基在121℃条件下，灭菌30分钟，冷却至37℃时，接种一种或一种以上的双歧杆菌，在37℃条件下培养18小时，控制含菌量达2.2×10⁹个/ml时，用连续离心机回收得到湿菌体，

(3)将上述湿菌体悬于PH为5.6、浓度为20％的脱脂奶粉液中，充分混匀，冻结干燥得菌粉，控制含活菌数为4.0×10¹⁰个/g。

(三)、将上述的蛋黄抗体冻干粉和冻干菌粉，按下述配合量混合配制，其配合量为：蛋黄抗体冻干粉10mg-2000mg/一次服用量，一种或一种以上的双歧杆菌的活菌数为0.1亿个-4亿个。