[发明专利]丙型肝炎病毒复合多价疫苗基因的合成与克隆无效

申请号：	97106660.4	申请日：	1997-10-14
公开（公告）号：	CN1086421C	公开（公告）日：	2002-06-19
发明（设计）人：	黄建生;任大明;林元凯;解咏梅	申请（专利权）人：	复旦大学
主分类号：	C12N15/51	分类号：	C12N15/51;C07K14/02;C12N1/21;A61K39/112;A61K39/295;A61P31/12
代理公司：	上海正旦专利代理有限公司	代理人：	姚静芳
地址：	20043***	国省代码：	上海;31
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摘要：
搜索关键词：	肝炎病毒复合疫苗基因合成克隆
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【权利要求书】：

1.一种丙型肝炎病毒(HCV)复合多价疫苗基因，其特征是从HCV基因组中优选了编码5个高度保守的保护性表位的核苷酸序列，这些表位包括4个T细胞表位及一个B细胞表位，其中一个T细胞表位同时含有B细胞表位，另一个T细胞表位含存一个B细胞表位的部分序列，另外加入了一段编码破伤风类毒素(TT)外源刺激表位的核苷酸序列及一个9bp的原核翻译增强子，这些编码表位的序列组合成了一段长为270bp的复合多价抗原基因(见图5)，各表位间用甘氨酸及脯氨酸来连接。其表位选择如下：

表位来源表位氨基酸序列表位性质

C MTSTNPKPQRKTKRNTN(1-16) B

C DLMGYIPLVG(132-141) T

E1 RMAWDMMMW(317-326) T

NS3 TGDFDSVID(1445-1453) B/T

NS5 ELITSCSS(2781-2788) T(B)

TT IYSYFPSVD T

2.权利要求1所述的HCV疫苗基因的克隆与表达方法法，包括基因的拼接，转化及阳性重组子的筛选，其特征在于：

(1)通过分步退火连接，把所合成的14段基因小片段拼接成所设计的270bp的目的片段。

(2)通过转化、质粒抽提、酶切等方法筛选阳性重组克隆，并对基因进行鉴定。

(3)构建多种真核及原核表达载体。

(4)该基因在大肠杆菌获得初步表达产物并对表达产物进行初步纯化分析。