[发明专利]两性蛋白质转染药物试剂的制备方法

权利要求书

1、一种两性蛋白质转染药物试剂的制备方法，其特征在于所述方法包括：广谱性载药两性蛋白质转染试剂的制备方法和靶向性载药两性蛋白质转染试剂的制备方法，

①两性蛋白质醇溶液的制备：取纯系小麦中国春麦粉10-50g，于50-500ml的

  50-90％乙醇溶液抽提4-10小时，然后继续通过LD20柱层析技术进行常规

  纯化，取分子量为35KD-55KD部分进行以下实验；

②吸取上述①两性蛋白质醇溶液0.1-1.0ml，放入旋转瓶中，水泵抽掉保护

  液，于旋转瓶中形成一极薄层膜，称为固态两性蛋白质载体；

③用0.1-1.0ml兔抗人荧光抗体加入上述②固态两性蛋白质载体中，旋转旋

  转瓶，使载体由脱水状态即刻吸液膨胀复原成载兔抗人荧光抗体的球形体，

  称为载荧光抗体的两性蛋白质转染药物试剂。

④吸取对数生长期的小鼠骨髓瘤细胞SP2/0 0.1-10ml加入上述③所述载荧光

  抗体的两性蛋白质转染试剂中，混匀后放入37℃5％浓度二氧化碳的恒温

  培养箱中转染3-5小时，漂洗杂(未转入细胞内的荧光抗体)荧光后再于

  荧光显微镜下，可观察到具有荧光实体的转染有荧光抗体的小鼠骨髓瘤细

  胞；

以上为广谱性载药两性蛋白质转染药物试剂的制备方法；

⑤两性蛋白质醇溶液的制备方法同①所述，吸取两性蛋白质醇溶液200-600

  μl，抽干保护液，或半抽干保护液，继续加入0.6％-2.5％的戊二醛PB缓

  冲液400μl中，再漫漫加入羊抗兔荧光抗体200μl，混匀后暗处室温放置

  2-3小时；

⑥在荧光显微镜下观察⑤中所述靶向性两性蛋白质转染试剂可看到空心的并

  具有荧光的载体囊壁；

⑦用上⑤所述转染试剂在暗处抽掉液体并使靶向性两性蛋白质转染试剂固化

  于旋转瓶中形成一极薄的膜；用0.1-1.0ml Evan′s兰加入于旋转瓶中旋转

  旋转瓶，使脱水的靶向载体即刻吸液复原转化成载入Evan′s兰，成为载

  Evan′s兰的靶向性两性蛋白质转染试剂；

⑧取兔红血球0.1-1.0ml与靶向性载Evan′s兰的两性蛋白质转染试剂混合，

  于37℃温度下共同培养1-5小时；在显微镜下可观察到兔红血球与靶向性

    两性蛋白转染试剂的亲和现象；

以上为靶向性载药两性蛋白转染试剂的制备方法。

2、根据权利要求1④中所述用对数生长期的小鼠骨髓瘤细胞转染的广谱性载药两性蛋白质转染试剂，其特征在于同样可适用于小鼠淋巴细胞、鳞翅目昆虫细胞及处在萌发状态的植物花粉细胞。

3、根据权利要求1②或1③所述制备两性蛋白转染药物试剂，其特征在于，可根据不同需要调整载体颗粒的大小，适量控制大豆磷脂与小麦醇溶蛋白的重量比1∶1-100混合，脂质的加入是放大载体颗粒尺寸的一个途径，造粒过程可用高速搅拌器搅拌100×100rpm振荡或均质，可使颗粒减小到纳米水平。

4、根据权利要求1中③所述载荧光抗体的两性蛋白质转染药物试剂，其特征在于，所转染的药剂除荧光抗体外亦包括有极广的范围，可从0.4KD的染料到1×10⁶KD的DNA及其载体。

5、根据权利要求1中⑤⑥⑦⑧所述的靶向性载药两性蛋白质转染试剂，其特征在于，可以用各种类型抗体分子即包括直接与靶细胞抗原产生抗原抗体反应的各种第一抗体及间接与靶细胞及其相关抗体复合物产生免疫学反应的第二抗体及各种标记抗体，从而使两性蛋白质转染药物试剂成为载药试剂并具有与靶细胞之间显示的亲和力。