[发明专利]制备单体卡利许霉素衍生物/载体的共轭物的方法

权利要求书

1.一种制备有较高药物负荷量/得率和减少凝集量的单体卡利许霉素衍生物/载体共轭物的方法，共轭物有化学式

                     Pr(-X-S-S-W)_m

其中：

Pr为一种蛋白质载体，

X是一种连接剂，它包括有任何可与蛋白质载体反应的活性反应基团的产物，

W是通过除去天然存在的甲基三硫化物基团后形成的卡利许霉素基团；m是0.5至15的数，

所述方法包括步骤：

(1)使卡利许霉素衍生物和蛋白质载体在一个非亲核的，蛋白质相容的，pH范围约为4.0至8.5的缓冲液中培育，溶液还包括(a)一种选自丙二醇，乙醇，DMSO，及其组合的助溶剂，和(b)一种至少包括一个C₆-C₁₈羧酸的添加剂，其中培育在约25℃至约37℃进行约15分钟至约24小时；和

(2)纯化步骤(1)生成的共轭物以生产单体共轭物。

2.根据权利要求1所述的方法，其中X有化学式Z-Sp，其中：

Sp是直链或支链的二价或三价(C₁-C₁₈)基团，二价或三价芳基或杂芳基团，二价或三价(C₃-C₁₈)的环烷基或杂环烷基基团，二价或三价的芳基-芳基或杂芳基-芳基(C₁-C₁₈)基团，二价或三价的环烷基-烷基或杂环烷基-烷基(C₁-C₁₈)基团或二价或三价(C₂-C₁₈)不饱和烷基基团，其中杂芳基最好是呋喃基，噻嗯基，N-甲基吡咯基，吡啶基，N-甲基咪唑基，噁唑基，嘧啶基，喹啉基，异喹啉基，N-甲基咔唑基，氨基香豆素基，或吩嗪基和其中如果Sp是三价基团，Sp还可被低碳(C₁-C₅)二烷基氨基，低碳(C₁-C₅)烷氧基，羟基，或低碳(C₁-C₅)硫代烷基基团替代；和

Z是-NHC(＝O)-，-CH＝NNHC(＝O)-，-CH₂NHNHC(＝O)-，-CH＝NNHC(＝O)NH-，-CH₂NHNHC(＝O)NH-，-CH＝NNHC(＝S)NH-，-CH₂NHNHC(＝S)NH-，-CH＝N-，-CH₂NH-，-OC(＝O)-，-SS-，