[发明专利]哺乳动物细胞中的基因表达

权利要求书

1.一种核酸载体，包含：

(i)一个编码目的蛋白质的编码序列，它与一个能在重金属离子存在下指导此编码序列在哺乳动物细胞中表达的启动子可操纵连接；

(ii)包含金属硫蛋白基因的第一选择性标记序列，它与一个能在重金属离子存在下指导此金属硫蛋白基因在哺乳动物细胞表达的启动子可操纵连接；和

(iii)包含neo基因的第二选择性标记序列，它与一个能指导neo基因在哺乳动物细胞中表达的启动子可操纵连接。

2.根据权利要求1的载体，其中用于编码序列的启动子是金属硫蛋白基因启动子。

3.根据权利要求2的载体，其中启动子是小鼠金属硫蛋白基因I启动子。

4.根据前述任一项权利要求的载体，其中用于编码序列的启动子还与一增强子可操纵连接。

5.根据权利要求4的载体，其中增强子是小鼠肉瘤病毒增强子。

6.根据前述任意一项权利要求的载体，其中用于第一标记序列的启动子是金属硫蛋白基因启动子。

7.根据前述任意一项权利要求的载体，其中第一标记序列含一个人金属硫蛋白基因。

8.根据权利要求7的载体，其中用于第一标记序列的启动子是用于人金属硫蛋白基因的天然启动子。

9.根据前述任意一项权利要求的载体，它是一个DNA质粒。

10.根据前述任意一项权利要求的载体，其中编码序列编码人β干扰素或人促红细胞生成素。

11.携带有一种核酸序列的哺乳动物细胞，所述序列包含：

(i)一个编码目的蛋白质的编码序列，它与一个能在重金属离子存在下指导此编码序列在哺乳动物细胞中表达的启动子可操纵连接；

(ii)包含金属硫蛋白基因的第一选择性标记序列，它与一个能在重金属离子存在下指导此金属硫蛋白基因在哺乳动物细胞中表达的启动子可操纵连接；及可任选地含有；

(iii)包含neo基因的第二选择性标记序列，它与能指导neo基因在哺乳动物细胞中表达的启动子可操纵连接。

12.根据权利要求11的细胞，它们是野生型中国仓鼠卵巢细胞。

13.根据权利要求11或12的细胞，其中用于编码序列的启动子是金属硫蛋白基因启动子。

14.根据权利要求13的细胞，其中启动子是小鼠金属硫蛋白基因I启动子。

15.根据权利要求11至14任意一项的细胞，其中用于编码序列的启动子还与一增强子可操纵连接。

16.根据权利要求15的细胞，其中增强子是小鼠肉瘤病毒增强子。

17.根据权利要求11至16任意一项的细胞，其中用于第一标记序列的启动子是金属硫蛋白基因启动子。

18.根据权利要求11至17任意一项的细胞，其中第一标记序列包含人金属硫蛋白基因。

19.根据权利要求18的细胞，其中用于第一标记序列的启动子是用于人金属硫蛋白基因的天然启动子。

20.根据权利要求11至19任意一项的细胞，其中核酸序列是一个DNA序列。

21.根据权利要求11至20任意一项的细胞，其中编码序列编码人β干扰素或人促红细胞生成素。

22.一种权利要求11所定义的细胞的制备方法，该方法包括：

(a)用权利要求1至10任意一项定义的载体转染哺乳动物细胞；

(b)将被转染的细胞暴露于遗传霉素，由此排除缺失neo基因的细胞；并

(c)将经步骤(a)存活下来的细胞暴露于浓度逐渐增加的重金属离子中，由此筛选出所需要的细胞。

23.根据权利要求22的方法，其中步骤(c)中的细胞被暴露于达200μM的选自Cd²⁺、Cu²⁺和Zn²⁺的重金属离子。

24.neo基因和金属硫蛋白基因在一个载体中用作选择性标记的用途。