[发明专利]用大肠杆菌生产色氨酸

权利要求书

1.L-色氨酸产率增加的大肠杆菌菌株，在其基因组中包含编码部分缺陷型色氨酰-tRNA合成酶的突变基因，当该基因存在于非生产型菌株中时，其特征为温度依赖性色氨酸营养缺陷型，且该大肠杆菌菌株还在其染色体上具有选自mtr，aroP，tnaA或traB一组中的一个或多个基因的突变。

2.根据权利要求1的大肠杆菌菌株，其中所说的导致缺陷性色氨酸吸收的突变是aroP579，mtr-24和tnaA1。

3.根据权利要求1和2的大肠杆菌菌株，其中所说的编码部分缺陷型色氨酰tRNA合成酶的突变基因是trpS378等位基因，可以保藏在DSM(Deutsche Sammlung fur Mrkroorgamismen，Braun-schweig，Germany)的保藏号为DSM10118的大肠杆菌JP6006获得。

4.根据权利要求1至3的大肠杆菌菌株，所说的菌株被携带编码不受色氨酸反馈抑制的邻氨基苯甲酸合成酶的色氨酸操纵于的质粒转化。

5.根据权利要求1至4的大肠杆菌菌株，它具有选自trpEDC-BA组的一个或多个基因的突变，当trpEDCBA存在于非生产型菌株中时，使细胞成为色氨酸营养缺陷型。

6.根据权利要求4的大肠杆菌菌株，其中所说的质粒是pMU3025且携带trpE483等位基因，所说的质粒在图6c中表示且可以保藏在DSM，保藏号为DSM10/21的大肠杆菌JP6768/pMU3025中获得。

7.根据权利要求4和5的大肠杆菌菌株，其中所说的质粒是pMU3028且携带trpE483等位基因，trpDCBA基因和SerA⁺，所说的质粒在图8中表示且可以以保藏号DSM10122保藏在DSM的大肠杆菌JP4735/pMU3028中获得。

8.根据权利要求3、4和5的大肠杆菌菌株，其中所说的质粒是pMU91且携带trpE476DCBA基因和SerA⁺，所说的质粒在图9中表示且可以以保藏号DSM10123保藏在DSM的大肠杆菌JP6015/pMU91中获得。

9.根据权利要求1至8的大肠杆菌菌株，它且有一个或多个下列：trpR.tyrR，SerA，aroG(导致DAHP合成酶(Phe)对反馈抑制产生抗性)，aroH(导致DAHP合成酶(Trp)对反馈抑制产生抗性)，trpE(导致邻氨基苯甲酸合成酶对反馈抑制产生抗性)的突变。

10.一种用于稳定根据权利要求1的具有L-色氨酸产率的大肠杆菌之特征的方法，在接种物生长期间向大肠杆菌菌株基因组中导入编码部分缺陷型色氨酰tRNA合成酶的突变基因，当该基因存在于非生产型菌株中时，其特征是温度依赖性色氨酸营养缺陷型，且还在其染色体上导入aroP，mtr，tnaA或tnaB基因的突变并在低温，例如27-30℃下培养所说的菌株。

11.根据权利要求10的方法，其中所说的突变是aroP579，mtr^-24和tnaA1。

12.根据权利要求10和11的方法，其中所说的大肠杆菌菌株携带一个质粒。

13.根据权利要求12的方法，其中所说的质粒携带trpE483等位基因。

14.根据权利要求10至13的方法，其中在接种物生长期间加入酵母提取物。

15.一种经发酵生产L-色氨酸的方法，它包括：在大约30℃下优选在酵母提取物存在的条件下根据权利要求1至9的大肠杆菌菌株的接种物生长(培养)，在合适的生长培养基中以可获得的磷酸盐浓度的限制生长，在33℃至37℃的温度范围内，在缺乏酵母提取物的条件下发酵，以及在所得的培养液中回收积累的色氨酸。

16.根据权利要求15的生产L-色氨酸的方法，其中所说的发酵在缺乏抗生素的条件下进行。