[发明专利]辣椒植物遗传转化和再生的方法

权利要求书

1.一种用于辣椒遗传转化的方法，其特征在于：采用辣椒植物的下胚轴为外植体进行转化和再生；经农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导转化后，下胚轴经过诱导培养、选择性诱导培养、选择性再生培养后可得到辣椒的再生芽；再生芽通过选择性芽伸长培养和选择性生根培养再培养，可使再生芽伸长并长出正常的根，得到转化后再生的完整辣椒植株。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：辣椒植物下胚轴是由辣椒种子生长培育出的实生苗获得的。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于：选取成熟的辣椒种子，经过含0.1％吐温-20的0.1％HgCl₂溶液，进行种子表面消毒，消毒时间1至2分钟，可保证种子正常萌发。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于：种子萌发的温度为28℃，置于黑暗处，培养时间为9天，然后转移至25℃±2℃培养，培养3至5天，可以得到实生苗。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于：辣椒植物外植体下胚轴是指辣椒实生苗苗龄为12天至14天时的下胚轴，这时的下胚轴用于辣椒的转化和再生可以得到理想的结果。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于：采用的农杆菌，培养时要加入乙酰丁香酮，加入量为每升培养液中含25-75毫克。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于：农杆菌介导的转化，菌液浓度要适当稀释，稀释时用pH7.0的MS液体培养液，稀释程度为测定菌液光密度OD560nm时，测定值范围为0.1至0.3之间。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于：用于稀释农杆菌的稀释液中可以含有25-75毫克/升的乙酰丁香酮。

9.如权利要求1所述的方法，其特征在于：诱导培养是指辣椒植物下胚轴经农杆菌介导的转化后，转入含有1.0-3.0毫克/升BA和0.1-1.0毫克/升IAA的培养基中培养。

10.如权利要求9所述的方法，其特征在于：下胚轴在诱导培养基上培养的温度范围为25℃±2℃，培养时间为1-3天，培养时要置于暗处避光。

11.如权利要求1所述的方法，其特征在于：选择性诱导培养是指经诱导培养基上培养的下胚轴进入含1.0-3.0毫克/升BA和0.1-1.0毫克/升IAA、75毫克/升卡那霉素和300毫克/升羧苄青霉素培养基中培养。    

12.如权利要求11所述的方法，其特征在于：下胚轴在选择性诱导培养基上的培养温度为25℃±2℃，培养2-5天。

13.如权利要求1所述的方法，其特征在于：选择性再生培养是指经诱导和选择性诱导培养后下胚轴植入含0.1-1.0毫克/升BA、0.01-0.1毫克/升IAA、75毫克/升卡那霉素和300毫克/升羧苄青霉素培养基中再培养。

14.如权利要求13所述的方法，其特征在于：下胚轴在选择性再生培养时，培养时间为2-3周，培养温度为25℃±2℃。

15.如权利要求13所述的方法，其特征在于：下胚轴经2-3周培养后，转移到选择性再生培养基中卡那霉素的含量降为50毫克/升，每隔2-3周更换一次新鲜培养基，培养时需用日光灯连续光照，培养温度为25℃±2℃。

16.如权利要求15所述的方法，其特征在于：下胚轴经过选择性再生培养时，其两端切口外周膨大的愈伤处长出再生芽。

17.如权利要求1所述的方法，其特征在于：选择性芽伸长培养是指再生芽在含0.05-0.2毫克/升IAA、50毫克/升卡那霉素和300毫克/升羧苄青霉素的选择性芽伸长培养基中培养，以促其芽伸长。

18.如权利要求17所述的方法，其特征在于：再生芽在选择性芽伸长培养基上再培养，芽可以继续生长伸长，待芽伸长至2厘米并有2-3个节时，伸长芽最宜生根。

19.如权利要求1所述的方法，其特征在于：选择性生根培养是指芽伸长后在含0.05-0.20毫克/升IBA、50毫克/升卡那霉素和300毫克/升羧苄青霉素的选择性生根培养基上培养，以促其生根。

20.如权利要求18所述的方法，其特征在于：芽伸长为2厘米时，从基部将茎芽切下，植入选择性生根培养基上，经过约两周左右的时间茎芽可以长成有正常根的完整辣椒植株。