[发明专利]重组人组织型纤溶酶原激活剂两步纯化方法

权利要求书

1.一种重组人组织型纤溶酶原激活剂(rt-PA)的两步纯化方法，由微孔高硅玻璃珠(MPG)吸附层析和赖氨酸(Lys-Sepharose 4B)亲和层析组成，其特征在于其中的MPG吸附层析法，

2.如权利要求1所述一种rt-PA的两步纯化方法，其特征在于(1)MPG的表面含有丰富的硅羟基；(2)MPG的粒径为75～125μm；(3)其微孔径为35nm，

3.如权利要求1所述一种rt-PA的两步纯化方法，其特征在于MPG对rt-PA的结合量是以100～120ml/g MPG来计算的，

4.如权利要求1所述一种rt-PA的两步纯化方法，其特征在于含rt-PA的有血清细胞培养上清通过MPG吸附层析柱的流速为200cm/h，

5.如权利要求1所述一种rt-PA的两步纯化方法，其特征在于MPG层析柱内未结合的蛋白用0.02MPBS、0.01％Tween80、pH7.4进行洗涤，

6.如权利要求1所述一种rt-PA的两步纯化方法，其特征在于部分结合于MPG上的杂蛋白用0.02MTris、0.5M NaCl.、0.01％Tween80、pH7.4进行洗脱，

7.如权利要求1所述一种rt-PA的两步纯化方法，其特征在于结合于MPG上的rt-PA用0.02MTris、0.5M NaCl、0.5M Arginine、0.01％Tween80、pH7.4进行洗脱，

8.如权利要求1所述一种rt-PA的两步纯化方法，其特征在于含rt-PA的0.02MTris、0.5M NaCl、0.5M Arginine、0.01％Twwen80、pH7.4洗脱组分用去离子水稀释4～5倍后，以100cm/h的流速通过Lys-Sepharose 4B亲和层析柱，

9.如权利要求1所述一种rt-PA的两步纯化方法，其特征在于MPG吸附层析和Lys-Sepharose 4B亲和层析纯化的全过程均在4～8℃下进行。