[发明专利]9，10-二氢化吖啶化合物发光的新方法和试剂盒

权利要求书

1.产生化学发光的方法，该方法包括：

a)在中间体化合物能积累的时间、温度和第一个pH水平的条件下，使过氧化物和过氧化物酶与9，10-二氢化吖啶反应；和

b)将pH提高至足以使该中间体与过氧化物的反应能突然发光的第二个pH水平，其发光强度基本上大于该pH提高前产生的强度。

2.根据权利要求1的方法，其中9，10-二氢化吖啶具有下述的通式：其中R选自烷基、杂烷基和芳烷基，其中的R₁-R₈各自独立地选自可产生光的基团，其中Y是离去基团。

3.根据权利要求2的方法，其中R₁是选自烷基，烷氧基和卤素的基团。

4.根据权利要求3的方法，其中9，10-二氢化吖啶环上至少两个取代基选自烷基和烷氧基。

5.根据权利要求1的方法，其中的9，10-二氢化吖啶如下式所示：

其中R选自烷基，杂烷基和芳烷基，其中Y是离去基团。

6.根据权利要求2的方法，其中基团Y是至少一个氟原子取代的苯氧基。

7.根据权利要求1的方法，其中9，10-二氢化吖啶是2′，3′，6′-三氟苯基1，6-二甲氧基-10-甲基-9，10-二氢化吖啶-9-羧酸酯。

8.在用化学发光反应的测试方法中检测被分析物是否存在或其存在量的方法，该方法包括：

a)在中间体化合物能积累的时间、温度和第一个pH水平的条件下，使过氧化物和过氧化物酶与9，10-二氢化吖啶反应；和

b)将pH提高至足以使该中间体与过氧化物的反应能突然发光的第二个pH水平，其发光强度基本上大于该pH提高前产生的强度。

c)建立发光量与被分析物的存在和数量的关系。

9.根据权利要求8的方法，其中的9，10-二氢化吖啶如下式所示：其中R选自烷基、杂烷基和芳烷基，其中的R₁-R₈各自独立地选自可产生光的基团，其中Y是离去基团。

10.根据权利要求8的方法，其中的被分析物是过氧化物。

11.根据权利要求8的方法，其中的被分析物是过氧化物酶。

12.根据权利要求8的方法，其中过氧化物酶与选自半抗原、抗原、抗体和寡核苷酸的特定结合对的一个成员相连接。

13.在用产生中间体化合物的化学发光反应的测试方法中检测被分析物是否存在或存在量的试剂盒，该试剂盒包括在几个独立容器中装载：

a)一种9，10-二氢化吖啶化合物；

b)一种过氧化物的水溶液，其pH在能形成中间体化合物的第一个水平上；

c)单独存在或与结合被分析物的化合物相连的一种过氧化物酶；和

d)可使溶液的pH提高到第二个水平的一种试剂，

其中检测光的试验是将该9，10-二氢化吖啶化合物与该过氧化物以及该过氧化物酶反应生成一种中间体化合物，随后用该试剂将溶液的pH提高至第二个水平。

14.根据权利要求13的试剂盒，其中9，10-二氢化吖啶化合物如下式所示：其中R选自烷基、杂烷基和芳烷基，其中的R₁-R₈各自独立地选自可产生光的基团，和其中Y是离去基团。