[发明专利]增强的病毒介导的DNA转移

权利要求书

1.一种通过不能复制的重组逆病毒载体提高活的造血细胞转导频率的方法，此方法包括在存在基本纯的纤维结合素，基本纯的纤维结合素片段，或者它们混合物的条件下，用不能复制的重组逆病毒载体来感染活的造血细胞，从而通过逆病毒载体提高造血细胞转导频率。

2.权利要求1的方法，其中造血细胞中有一种蛋白缺失或异常，重组逆病毒载体包含编码该蛋白的外源基因。

3.权利要求2的方法，其中外源基因是编码腺苷脱氨酶的基因。

4.权利要求3的方法，其中外源基因是编码人类腺苷脱氨酶的基因。

5.权利要求1的方法，其中细胞是在存在一种纤维结合素片段的条件下被逆病毒载体感染的，该片段包含一段CS-1区中具有细胞结合活性的氨基酸序列和一段肝素II区中具有逆病毒结合活性的氨基酸序列。

6.权利要求1的方法，其中造血细胞包括人类干细胞。

7.权利要求6的方法，其中造血细胞被表征为非粘附性、低密度、单核的细胞。

8.一种制备转导的造血细胞的方法，其包括：

在存在固定化纤维结合素，固定化纤维结合素片段，或它们的混合物的条件下用不能复制的重组逆病毒感染培养的活的造血细胞，以制备转导的造血细胞。

9.权利要求8的方法，其包括收获转导的造血细胞。

10.权利要求8的方法，其中造血细胞中有一种蛋白缺失或异常并且重组逆病毒载体中包含编码此蛋白的外源基因。

11.权利要求8的方法，其中造血细胞中有一种酶缺失或异常并且外源基因是编码这种酶的基因。

12.权利要求11的方法，其中造血细胞是有一种酶缺失或异常的人类造血细胞，外源基因是编码这种酶的人类基因。

13.权利要求11的方法，其中造血细胞缺失腺苷脱氨酶，外源基因编码腺苷脱氨酶。    

14.权利要求12的方法，其中人类造血细胞缺失腺苷脱氨酶，外源基因编码腺苷脱氨酶。

15.权利要求12的方法，其中用逆病毒感染细胞是在存在包含一段CS-1区中具有细胞结合活性的氨基酸序列和一段肝素II区中具有逆病毒结合活性的氨基酸序列的固定化的纤维结合素片段的条件下进行的。

16.权利要求15的方法，其中造血细胞包含人类干细胞。

17.权利要求16的方法，其中造血细胞被表征为非粘附性、低密度、单核的细胞。

18.一种改进的细胞移植方法，其包括：

从动物供体中获得活的造血细胞；

用包含外源DNA的无复制能力的重组逆病毒载体感染这些活的造血干细胞，以产生转导的活的造血细胞，感染过程中有固定化量的纤维结合素和/或纤维结合素片段存在，从而可有效地提高逆病毒载体介导的细胞转导效率；

把转导的活的造血细胞作为移植体引入动物受治疗者体内。

19.权利要求18的方法，其中所述细胞移植是为了治疗动物受治疗者的骨髓血疾病。

20.权利要求18的方法，其中所述细胞移植是为了治疗动物受治疗者的一种蛋白缺失或异常。

21.权利要求19的方法，其中动物供体和受治疗者是人。

22.权利要求21的方法，其中动物受治疗者是自身供体。

23.一个适于接受逆病毒介导基因转移的细胞类群，其包括：

在包含有固定化的纤维结合素，固定化的纤维结合素片段，或其固定化混合物的培养基中的活的造血细胞。

24.一种可以维持活的造血细胞的培养基，其含有固定化的纤维结合素，固定化的纤维结合素片段，或它们的混合物。

25.一种包含通过逆病毒介导的基因转移而被转导的活的造血细胞的细胞类群，所述基因转移是在存在固定化的纤维结合素，固定化的纤维结合素片段，或其固定化混合物的条件下进行的。