[发明专利]测定人免疫状态抑制基因成分的方法及其试剂盒

说明书

本发明涉及医学，特别是涉及诊断评价T-抑制基因活性的方法，即涉及测定人免疫状态抑制基因成分的方法，也涉及其实现手段。

来源于胎盘的β-I-糖蛋白是已知的，它是用作造血细胞的生长和增殖刺激因子的滋养性β-I-糖蛋白(TBG)的类似物(US专利5169835，Cl.A61K 35/50，1989)。

然而，该已知的化合物未被用于测定人免疫状态抑制基因成分。

将TBG用于诊断和预示怀孕过程是已知的(见L.G.Sotnikova等，The Role of β-I-glycoprotein Trophoblast in Diagnosing andPrognpsticating Pregnancy，Metodicheskije Recomendatsii，Moscow，1984)。然而所述研究未公开将TBG用于诊断人免疫状态抑制基因成分的可能性。

测定人免疫状态抑制基因成分的方法是已知的，它包括收集外周血，获得用来培养有抑制基因激活剂和无此激活剂的试验培养物的纯淋巴细胞悬浮液，并进一步评价增殖水平(见Dutton R.W.Inhibitory andStimulatory Effects of Concanavalin A on the Response of Mouse Spleencells Suspensions to Antigen.J.Exp.Med.，V.138，P.14961505，1973)。

然而，已知方法需要一种很难得到且昂贵的外来制剂，那就是作为抑制基因激活剂的伴刀豆球蛋白A。

测定人免疫状态抑制基因成分的方法是已知的，它包括收集外周血，获得单核细胞(MNC_s)悬浮液，将所述悬浮液分为两等份，在无抑制基因激活剂存在下培养第一份MNC_s并在抑制基因激活剂存在下培养第二份MNC_s，从培养基中洗出MNC_s并阻断增殖，将从正常供体中新鲜分离的MNC_s加到上文所述的各份MNC_s中，用等份的植物血凝素来刺激而获得试验培养物，培养它们并进一步评价在所述试验培养物中的增殖情况，基于在所述各种试验培养物中增殖水平之比来确定抑制值(见Lien Shov，Stanley A.Schwarts and Robert A Good Suppressor cellActivity after Concanavalin A treatment of Lymphocytes from NormalDonors J.Exp.Med.，1976，v.143，n.5，p.1100-1110)。

然而，所述已知方法也需要很难得到的且昂贵的外来制剂，即伴刀豆球蛋白A。

本发明的主要目的是提供一种使用易于获得的制剂来测定人免疫状态抑制基因活性的低费用方法，所述制剂具有免疫校正活性且不引起过敏反应。

通过将滋养性β-I-糖蛋白(TBG)用作测定人免疫状态抑制基因成分的试剂来完成所述目的，而且本发明的测定人免疫状态抑制基因成分的方法包括以每毫升MNC悬浮剂3-120μg的剂量使用滋养性β-I-糖蛋白，该方法包括收集外周血样，获得单核细胞(MNC_s)悬浮液，将所述悬浮液分为两份，在不存在抑制基因激活剂下培养第一份，在含抑制基因激活剂下培养第二份，从培养基中洗出MNC_s，阻断增殖，将从正常供体获得的新鲜分离的MNC_s加到各个所述MNC部分中，用等份的植物血凝素刺激来产生试验培养物，培养所述培养物，进一步评价所述培养物的增殖情况并基于试验培养物中增殖水平之比来确定抑制值。

由细胞可制备MNC悬浮液，该细胞是从phycoll-urotrust Single-stepgradient(番考尔-乌拉斯特一步梯度)中分离而获得的，MNC_s培养进行48小时，用丝裂霉素C处理MNC_s来阻断增殖，并可将各个试验培养物培养72小时。

实验和临床试验已经显示TBG作为用来测定人免疫状态抑制基因成分的抑制基因激活剂的新特性。

第一步是由细胞制备MNC悬浮液，该细胞是由phycoll-urotrust Single-stage density gradient(番考尔-乌拉斯特一步密度梯度)(Boyum方法)中分离而获得的。