[发明专利]鲎试剂的活性定向生产工艺

权利要求书

1、一种鲎试剂的活性定向生产工艺，用抗凝剂、洗涤剂、破解剂、增敏剂、至敏保护剂对鲎血进行处理，通过两次离心分离，其特征在于生产工艺如下：

A、将新鲜活鲎洗净，用75％的乙醇消毒，心门采血，加入抗凝剂浓度为0.025M茶碱溶液体积比为1∶4.5，在10℃制鲎血；

B、在750-800转/分的速度下将鲎血离心分离，弃蓝色血清，将余下的白色细胞按体积比1∶4加入助悬洗涤剂浓度为0.5M的NaCl溶液，处理后，加入0.03M的tris-HCl溶液的细胞破解剂，至使血细胞完全破解，在0℃下存放获得细胞内溶物：

C、加入体积比为1∶0.6的CHCl₃，在2-5℃下振摇，在2500转/分的速度下离心分离，收集细胞内溶物即鲎试剂原液，加入增敏剂使NaCl浓度为0.5M，CaCl₂0.31M的混合液7％(g/v)，并预检，再加入至敏保护剂，每毫升含(1-3)-β-Glucn(真菌多糖)100rg浓度即可分装，提高鲎试剂与细菌内毒素特异性反应，在零下45℃-55℃冻干，在35℃以下封口制成品。

2、据权利要求1所述的鲎试剂的活性定向生产工艺，其特征在于对加入的抗凝剂：是使用0.025M的NaOH或HCl溶液加热40分钟，除去溶媒中的细菌内毒素，调PH值至中性，加入预配好的无菌辅料溶液稀释，使每100ml溶液中含茶碱0.025M，NaCl0.5M，用tris-HCl调PH值为7.6-7.8，加入0.6％(g/v)活性碳吸附脱色，加热15分钟抽滤分装再在120℃高压消毒60分钟，抗凝剂与鲎血体积比为1∶4.5。

3、据权利要求1所述的鲎试剂的活性定向生产工艺，其待征在于：加入的助悬洗涤剂是用0.025M NOH或HCl溶液加热40分钟，破坏溶媒中污染菌，调PH值中性，加入NaCl溶液使每毫升含量为0.5M浓度，用tris-HCl调PH值为7.6-7.8，加入0.6％(g/v)活性碳吸附脱色，抽滤分装，在120℃高压灭菌备用，洗涤剂与鲎血细胞存余量之比为1∶4(v/v)。

4、据权利要求1所述的鲎试剂的活性定向生产工艺，其特征在于：加入的破解剂是用0.08M NOH或HCl溶液加热40分钟，调PH值中性，用0.03Mtris-HCl溶液调PH值为7.6-7.8，加入0.6％(g/v)活性碳吸附脱色，抽滤分装，高压消毒备用，破解剂与离心分离出的鲎血细胞体积比1∶8。

5、据权利要求1所述的鲎试剂的活性定向生产工艺，其特征在于：加入的增敏剂用0.15MNOH或HCl溶液加热40分钟，调PH值中性，加入NaCl溶液为0.5M、CaCl₂溶液为0.31M、MgCl₂溶液为0.41M的溶液中加碳0.6％(g/v)吸附脱色，加热15分钟抽滤分装，高压灭菌备用，增敏剂与鲎试剂原液体积比7％。

6、据权利要求1所述的鲎试剂的活性定向生产工艺，其特征在于：加入的活性调节保护剂，又称至敏保护剂，是用0.05-0.1M NOH或HCl溶液加热40分钟，调PH值中性，加入(1-3)-β-Glucn(真菌多糖)  浓度为100ng/ml的活性保护剂，作为鲎试剂的灵敏度调节试剂，以实现活性定向生产。