[发明专利]单胞菌酸的酶法制备

说明书

本发明涉及将假单胞菌酸(pseudomonic acid)及其酯转化成相应的单胞菌酸(monic acid)的方法。

已经知道假单胞菌酸有抗细菌特性，所知的假单胞菌酸包括四氢吡喃基化合物假单胞菌酸A(Nature，1971，234-416，JCS Perkin，Trans.I，1977，294)、假单胞菌酸B(JCS Perkin，Trans I，1982，2827)、假单胞菌酸C(JCS Perkin，Trans I，1982，2827)和假单胞菌酸D(JCS Perkin，Trans I，1983，2655)。

特别地是，本发明提供了将假单胞菌酸A(麦吡罗素mupirocin)(I)转化成单胞菌酸A(II)或将假单胞菌酸C(III)或其甲酯转化成单胞菌酸C(IV)的方法，所说物质通式如下：

单胞菌酸在生产生物活性的化合物尤其是在生产药物中用作起始物。Beecham Group plc GB 1587058描述了单胞菌酸的化学制备方法，用化学方法制备存在一个提取产物的问题。

现在需要一种替代化学水解假单胞菌酸成单胞菌酸的方法。虽然已知道有很多水解酶，但我们意外地发现至今所试用的60种或如此通用的动物、植物和微生物性水解酶(例如Sigma化学公司，Poole，Dorset)中没有看到有适用的活性。例如，枯草杆菌蛋白酶E.C.3.4.21.14被发现不能水解假单胞菌酸A类似物中的9-羟基壬酸酯(Sime et al.1987，Tetlett 28(43)，pp 5169-72)。

Freer等(同位素标记化合物的合成和应用，Proceeding 3rdInternational Symposium，Elsevier)用哺乳动物的酶(猪肝的酯酶)将麦吡罗素[2-¹⁴C]转变成单胞菌酸[2-¹⁴C]。我们也发现这并不能提供所需要的活性水平。

现在我们已找到在本发明所说方法中适用的酶，它们能从某些放线菌(Actinomycetes)，特别是从北里孢菌属(Kitasatosporia)、克勃特尔孢囊菌属(Kibdelosporangium SP.)的菌种和一些链霉菌属(Streptomyces SP.)的菌种中分离到。

因此，本发明提供了一种生产单胞菌酸的方法，它包含将相应的假单胞菌酸或其酯与来自合适微生物的水解酶相接触。

就假单胞菌酸的酯来说，我们包括的是那些由本发明的水解酶所裂解以产生相应的单胞菌酸的酯。合适的酯包括(C1-C6)酯，特别是甲酯。

本发明也提供筛选能将假单胞菌酸转化成单胞菌酸的微生物的方法，该方法包括将所说的微生物与假单胞菌酸一起培养并与假单胞菌酸标准相比较测定其抗细菌活性的丧失。

特别适用的微生物包括变青链霉菌(S.lividans)特别是变青链霉菌菌株NCIMB 11416、灰褐链霉菌(S.giseofuscsus)菌株ATCC23916和产二素链霉菌(S.ambofaciens)菌株ATCC 23873以及干裂克勃特尔孢囊菌(Kibdelosporangium aridum)ATCC 39922。菌株北里孢菌(Kitasatosporia)NCIMB 40568是一种新的微生物并因此成为本发明的另一个方面。该菌株于1993年6月14日已在苏格兰Aberdeen国家工业和海洋细菌菌株保存中心保存，其登记号为NCIMB40568。

北里孢菌菌株NCIM4B 40568为灰色孢子并具有以下特征：胞壁肽聚糖：左旋二氨基庚二酸/内消旋氨基庚二酸(LL-A_2pm/meso-A_2pm)[Buchanan R.E.和Gibbons，N.E.伯杰的细菌鉴定手册]。

按照本发明培养微生物的培养基适当地含有可以同化的碳源与氮源以及无机盐。合适的氮源包括玉米浆、酵母提取物、大豆粉、肉膏、棉籽粉、面粉、麦芽、酒糟干燥可溶物、氨基酸、蛋白水解物以及铵和硝态氮。合适的碳源包括葡萄糖、乳糖、麦芽糖、淀粉、甘油和糖浆例如福氏糖浆。

合适的培养基还要包括碱金属离子(例如钠)、卤素离子(例如氯化物)和碱土金属离子(例如钙和镁)以及痕量元素例如铁和钴。

适宜地，细胞通过离心或过滤进行收集。

本发明的生物转化/方法能用整个细胞、渗透过的细胞的无细胞提取物或从微生物中分离的酶或其中的任一固定化形式去实现。