[发明专利]一种对白细胞介素-5受体依赖细胞信息传递通路有调整作用的物质筛选方法

说明书

本发明涉及一种寻找药理活性物质的方法，该方法是通过测定物质对人或动物细胞的白细胞介素-5受体依赖的信息传递通路的调整作用进行的。

通常所称的“放射性配体检测”(检测配体)方法，其中检测一个物质，它以何种程度代替结合到受体的配体，并可用这种方法来寻找具有药理作用的物质，在这种情况下，只有那些影响熟知的配体结合的受体结合点的物质才被特异性地识别。这种检测不能区别结合物质是否有竞争作用或拮抗作用。

高等真核细胞的越膜信息传递系统通常有下列结合到膜上的成分组成：

a)细胞表面的受体，它可能有多个亚基组成，也有可能是

b)-个结合鸟苷和裂解GTP的调节蛋白，人们称这种蛋白为G-蛋白，这种蛋白甚至也能与受体耦联，把受体作为自己的效应物。

c)所谓“效应物”，它常常导致第二信使分子，如cAMP、DAG、IP3等浓度改变，例如离子通道、腺苷酸环化酶、鸟苷酸环化酶或磷酸酯酶；和/或

d)各种激酶。

细胞表面的受体能从受到的众多的细胞外刺激中识别出适当的配体。配体结合到受体上后，活化信息级联。与G-蛋白耦联的受体的情况下该信息传递通路了解得相对清楚，并随着异型三聚体G-蛋白的活化开始使细胞外的信息产生各种各样的作用。

低分子量的第二信使，如cAMF(环状AMP)(通过腺苷酸环化酶活化产生)；cGMP(环状GMP)(通过鸟苷酸活化酶作用产生)；肌醇-1，4，5-三磷酸酯(IP₃)，和二酯酰丝氨酸(DAG)(通过磷酸酯酶活化产生)，如磷酸酯酶C，或在羟化酶参与下的磷酸酯酶D(Billah et al.，1989)导致细胞内变化，即通过蛋白激酶的活化使蛋白质选择性地磷酸化(如通过IP₃/DAG的PKC，通过cAMP的PKA)，它们都能影响特定基因的转录调节和细胞增殖。(一个具有拮抗作用的物质能消除通过竞争作用物引起的相互作用和部分地或全部地消除由此产生的第二信使的浓度变化，也就是说本身导致了可逆的功能效应)。细胞能通过这个信息传递系统，进行通讯和协调功能。

因为一个单独的受体亚型(可能存在于同一个细胞里，也可能存在于不同的细胞里)能和一个以上的效应物耦联，并多个受体亚型能活化相同的效应物，这样就构成了复杂的信息传递网。受体在信息传递级链中活化的结果导致活化的转录因素(例如CREB-蛋白，AP1-蛋白)并与调节DNA的成份相互作用。这方面的实例是CRE(CRE-成份，cAMP反应成分)及TRF(TRF＝TPA反应成份；TPA＝佛波醇(phorbol)-12-肉豆蔻酸酯-13-乙酸酯＝佛波醇酯(phorb-olester))。CRE和TRE与CREB或AP1结合。很多通过cAMP调节转录的基因(例如，大白鼠的生长激素释放抑制因子，人的α-促性腺激素，c-fos)，其5′一侧区域含有一个作为调节成份的保守顺序。CRE一顺序与回纹八聚体TGACGTCA一致或相似(Montminy et al.，1990)，TRE-区含有很相似的七聚物区TGAGTCA，它和CRE成分的保守顺序只有一个核苷酸之差(Deutsch et al.，1988)，TRE区，或非常相似的区，已从很多基因中辨别出来，通过佛波酯活化这些基因的转录(Angel et al.，1987 a和b；Lee et al，1987)相邻的DNA顺序或蛋白质-蛋白质和其它因子相互作用决定着对一个特定基因的具体调节现象。

其它DNA调节区就是所称的“SRE成分”，这个成分对血清因子起反应(“血清反应成分”，Treisman，1985)SRE区是可诱导的顺式成分，这个成分由20个碱基对组成，具有双向对称结构。SRE成分对不同生长因子有反应，不久前报导，通过不同的的细胞激动素(Cytokine)诱导c-fos时，SRE起着决定性作用(Hatakeyama etal.，1989)对糖皮质激素浓度变化起反应的区域称为GRE-成分(Yamamoto，1985；Scheidereit et al.，1986；Jantzen et al.，1987；Straehle，et al.，1987)。