[发明专利]有机化合物的或涉及有机化合物的改进

说明书

本发明涉及适于从组织培养中再生整个植株的改进的体细胞胚形成方法，更具体地讲，涉及使用液体培养基本身通过体细胞胚形成而获得体细胞胚的改进方法。

人们认为有效利用体细胞胚形成方法的商业化比(例如)有机生成的克隆更合乎需要，并且从经济上讲，它更吸引入，因为它具备在相对短的时间间隔内得到更高产量的植物的潜力。

已知当某些植物细胞在合适的植物组织培养基中培养时，它们具有分化为整个植株的潜力。这样的培养基通常含有无机盐、碳源(如蔗糖、肌醇、硫胺素等等)。普遍使用的植物组织培养基的实例是Murashiqe and Skoog(MS培养基)、Gamborg的Lindsmaier andSkoog(B5培养基)，等等。

为了使所用的特定的植物细胞进行最佳生长，可以改变植物组织培养基的组成。几乎所有植物细胞都需要植物激素，如生长素或类似生长素的化合物，如吲哚乙酸、吲哚丁酸、萘乙酸或2，4-D，和/或细胞分裂素(如苄基腺嘌呤、玉米素、激动素)等。为了保证最理想的生长，加入如烟酸、吡哆素等维生素或其他组分(如椰子奶、酪蛋白水解产物等)也可能是有用的。

过去，真正的体细胞胚的形成需要使用愈伤组织材料，该愈伤组织材料含有具有非常大的液泡且未分化的细胞团粒以及较小的有非常小的液泡的圆细胞，以该愈伤组织材料作为最初生长阶段材料并可从中衍生出细胞胚。但是在体细胞胚形成中使用这样的材料作为起始材料有许多缺陷，已证明，在获得大量具有基本相似的表型和/或在倍性水平方面基本一致的植物时，它的使用受到限制。起源于愈伤组织的植物，其体细胞克隆在倍性水平方面显示有变异和/或不整齐。(ChaleffR.s.(1983)science 219：676-682；Larkin P.J.(1987)Iowa State Journal of Research61(4)：393-434；De Klerk G-J(1990)Acta Bot.Neerl.39(2)：129-144；Karp A.& Bright S.W.J.(1985)OxfordSurveys of Plant Molecular & Cell Biology 2：199-234；Custers J.B.M.et al(1990)Acta Bot.Neerl.39(2)：153-161(cucumis sativus L.)；Kysely W.et al(1987)Plantcell Reports 6：305-308(pisum sativum L.)；Ezura H.(1992)Plant Science 85：209-213(cucumis melo)；andKiviharju E.et al(1992)Plant Cell，Tissue，and OrganCulture 28：187-194(Cyclamen persicum Mill)].

已有已知的专利申请实例描述了愈伤组织材料在体细胞胚形成中的应用。例如，WO 90/01058(Plant Genetics Inc)描述了使用愈伤组织材料来获得体细胞胚，同时考察了使用多种合成生长素的效果。将合适的外植体材料在固体培养基中培养和/或再次培养许多星期后即形成或长成愈伤组织，然后通过将愈伤组织转移到含有诸如2，4-D或它的一种类似物的植物激素的培养基中即开始体细胞胚形成。没有提及体细胞胚的倍性水平或获得的植物的倍性水平。在体细胞胚形成中使用愈伤组织材料可能有助于获得植物，其中获得的体细胞克隆变体或许对丰富有用的基因库有意义，但对简单希望获得具有基本相同的基因型的销售量植物的种子商人和育种者来说则无甚用途。

公知已从由分生组织细胞组成的微团将胡萝卜细胞系进行了克隆并研究了他们生成胚的能力(P.Coutos Thevenot等，Plant CellReports(1990)8：605-608)。