[发明专利]血样的间接荧光鉴定

说明书

本发明涉及一种一次性同时检测结合生物粒子的一种或多种活性偶对中任一方成份的存在或空缺的、并且在需要的时候检测它们在全血、血浆式血清样品中的量值的方法和装置。

对血样中抗体或抗原的存在或缺少进行分析被用于诊断一些疾病，诸如，HIV（人免疫缺陷病毒）感染、肝炎、Lyme病、包括TORCH（即弓形体病（Toxoplasmosis）、风疹（Rubella）、巨细胞病毒（Cytomegalovirus）、疱疹（Herpes）的缩写）检查在内的产前检查，及其它感染性疾病的检查。目前，这类血清诊断常通过标准的间接荧光免疫鉴定来完成。在标准间接荧光免疫鉴定中，抗原作为要检测的抗体的偶对一方首先被固定于固体支持介质中，例如玻璃载片、纸膜等，随后将病人血清样品与被固定的抗原接触下共同培养一段时间，这段时间足以使配对的抗体，如果存在的话，变得与被固定的抗原相结合。然后冲洗支持表面以除去所有未被结合的抗体。将包含一种已标记的人体免疫（抗体）球蛋白抗体的试剂送入与固体支持面相接触，并进行一段时间的培养;这段时间是足以引起已标记材料与可能已与固定抗原相组合的病人之抗体的任何痕迹相键合。再将剩余试剂冲洗掉，对固体支持面进行检验，确定是否有任何标志物存在。对这种制备的样品的检验可以用目测地进行、也可以利用分光光度测定或者X线测量法进行。显然，以上方法需要多个标本操作步骤，包括冲洗、分析技术，所以是相当费时费力。前述过程每次试验只能检查出一种特定抗原的抗体存在与否，若无进一步试验，不能把IgG和IgM区分开来，也不能同时检查出多抗原或抗体。

于1991年10月4日提交的共同待审美国专利申请第07/770，875提出了一种进行不同红血球进行计数的方法和装置，通过使具有不同带比重的微珠粒依比重形成密度分布带，下文将其称为密度标志物（density-markers）。本发明涉及一种用于快速简捷地检测在全血、血清或血浆样品中，结合生物粒子的一种或多种活性偶对的各方成份是否存在的方法和装置。这类可检测的偶对的例子如：促甲状腺激素/抗促甲状腺激素（TSH/Anti    TSH）复合物、T4/抗T4复合物、风疹抗体/抗风疹抗体、HIV抗体/HIV抗原;在此，TSH、T4、风疹抗体和HIV抗体都是目标分析物。本方法只不过需要在一离心管内将试管中的含有几种试剂的血样进行离心，并观察离心步骤的结果而实现的，检测可以在不将血样暴露给医生或技师的情况下进行。

在使包含全血样的试管内被离心之后，红细胞将在试管底部形成连续的密度梯度层，而最稠的红细胞落在红细胞的最底层。当血样在含有以上提到的包含不同比重珠粒或不同比重脂质体群的试管中被离心时，珠粒或脂质体将在红细胞叠层中形成分离的清晰可见的标志物环。离心管中还可以包含一个圆柱形塑料嵌入芯，它可以被固定于试管底部，或者可以在试管中自由活动。如果是自由活动的，它的比重将可以使其沉入离心后血样中的红细胞层。嵌入芯限制了红细胞在试管内可以占居的空间，因此增加了在离心后红细胞层中形成的标志物环之间的距离，并将珠粒或脂质体排至试管周壁，在此可以观察和容易地检测到这些标志物环，而它们的信号不会被红细胞所淹没。

在本发明方法的进行中，珠粒或脂质体将会与一个抗原或抗体相配对，或与另外一种生物活性物质相配对，这种生物活性物质的补体或结合各方（它们可被指定为“目标分析物”）可能存在于病人血液之中。生物活性互补偶对的例子包括：酶及其酶作用物、核甙酸及其互补核甘甙酸、自然出现的蛋白结合物，如：甲状结合球蛋白（TGB）和甲状腺素、“内在内子”和维他命B₁₂、以及一些将选择性地与RNA-DNA杂种相配对的特异性抗体，如Stollar和Rashtchian在他们发表于1987年161.387-394的分析生物化学杂志上的《基因探针鉴定的免疫化学入门》（Immunochemical Approaches to Gene Probe Assays）文章中所描述的。

每个密度标志物群，其中可能仅有一种将与一个偶对粒子相结合，它对一种目标分析物是特效的，这种分析物可能在血样或其它生物样品中存在。将该样品加入试管，以便使密度标志物/偶对粒子群或多群与样品混合，足以引起任何存在于样品中的目标分析物与在密度标志物上他们的补体配偶相配对。