[发明专利]修饰的血小板因子-4

说明书

本发明基于发现人血小板因子-4的一种新的N-末端区域的加工形式，即下文的修饰的血小板因子-4(MPF-4)。本发明也包括一种经蛋白质水解裂解、非还原形式的血小板因子-4，即下文的裂解血小板因子-4(CPF-4)。从脂多糖刺激的外周血白细胞耗尽的培养基中可分离到MPF-4和CPF-4。

经氨基酸测序揭示了MPF-4与以Ser-17开始的血小板因子-4(PF-4)同源，因而推断MPF-4是PF-4的一种自然发生的裂解产物。CPF-4具有与PF-4相同的氨酸酸顺序，但因在16与17残基间的肽键不存在而不同。然而，产生的两个肽仍通过二硫桥键合。最有意义地是，本发明的化合物是内皮细胞增殖的有效抑制因子，并且无论怎样都比天然的PF-4活性高出10-100倍，这有赖于PF-4来源及报道的实验室。

PF-4是正在扩大的小的可诱导蛋白质组成的家族的一个原型成员，当用有丝分裂原或细胞因子刺激后可从各种各样的细胞型中释放出来。这个蛋白质家族，被认为是“intercrines”，发现它调节各种生物过程，例如血管生成、细胞增殖、凝结、炎症和组织修复。参见Oppenheim等，《新的前炎症超基团“intercrine”胞质族的性质》，Ann.Rev.Immunol.9：617-648，1991；Taylar等，《精氨酸为血管生成的抑制剂》，Nature 297：307-312，1982；以及Maione等，《由重组人血小板因子-4和相关肽抑制血管生成》；Scrence 247：77-79，1990)。

intercrine家族的其它成员包含白细胞介素-8(IL-8)、黑素细胞生长刺激活性(hGro/MGSA)、β-血栓球蛋白(β-TG)、中性白细胞激活蛋白(NAP-2)、IP-10和巨噬细胞炎性蛋白(MIP-2)。参见Lindley等，《基团编码的单核细胞衍生的中性白细胞激活因子在大肠杆菌中的合成和表达：天然的和重组的中性白细胞激活因子之间的生物等价性》，Proc.Natl.Acad.Sci.85：9199-9203，1988；Walz等，《在受刺激的单核细胞培养物中形成的β-血栓珠蛋白的新的裂解产物激活人中性白细胞》，Biochem.Biophys.Res.Commun.159：969-975，1989；Luster等，《γ-干扰素转录调节含同源性的基因对血小板蛋白质的早期反应》，Nature 315：672-676，1985；以及Wolpe等，《巨噬细胞炎性蛋白质2的识别和表征》，Proc.Natl.Acad.Sci.86：612-616，1989)。

PF-4完整的一级结构在本领域是熟知的(Poncz等，《由人红白血病细胞系衍生的血小板因子-4 cDNA的克隆和表征》，Blood69：219-223，1987)。PF-4的类似物和片段也是熟知的，并在美国专利4,545,828和4,737,580中称作“制瘤素-A”，在此引用作为参考。研究显示了intercrine蛋白家族在N-末端区域含有特征的半胱氨酰-X-半胱氨酸(CXC)基元。CXC基元通过与Cys-36和Cys-51残基形成分子内二硫键参与产生天然PF-4的二级及三级结构(St.Charles等，《牛血小板因子-4的三维结构在3.0-A的分辨》，J.Biol.chem.264：2092-2098，1989)。

再者，基于公布的牛PF-4三维结构，确定了N-末端Gln-9到Val-19残基形成一个巨大的开环，Thr-16与Cys-51以氢键缔合。这些N-末端结构已表明对PF-4的免疫调节活性是重要的。(Katz等，《血小板因子-4的蛋白酶诱导的免疫调节活性》，Proc.Natl.Acad.Sci.83：3491-3495，1986)。