[发明专利]分离和克隆有酪氨酸-磷酸酶活性的蛋白质

说明书

本发明涉及跨膜酪蛋白磷酸酶，其编码DNA，生产和鉴定这些蛋白质的方法，以及筛选能够结合和抑制或刺激磷酸酶酶促活性之化合物的方法。

蛋白质酪氨酸残基的磷酸化状态在细胞生长控制中起着重要作用。通过调整两种相反作用的蛋白质-酪氨酸激酶和酪氨酸磷酸酶的相对活性来控制细胞磷酸酪氨酸水平。

几种生长因子受体，以及胰岛素受体都是酪氨酸特异性蛋白质激酶。

受体酪氨酸激酶的活化是通过与它们各自的生长因子或细胞激活素如FGF、EGF、PDGF、GM-CSF和IL-1的相互作用介导的，并通常诱导有丝分裂和生长（Yarden，Yand  Ullrich，A，：Annual  Rev.Biochem.57：443-478，1988）。发现许多致癌基因产物也可作为酪氨酸激酶并与已知的多肽生长因子受体分享广泛的顺序同源性，从而进一步支持酪氨酸磷酸化作用和细胞增殖之间关联的观点。这些观察结果提示，蛋白质酪氨酸磷酸酶因其能够选择性地抵消酪氨酸激酶的作用，而可能在控制细胞生长和活化中起到重要作用。因此，已证明酪氨酸磷酸酶抑制剂能够“可逆地转化”细胞，并且已提出在恶性增殖过程中可能包括PTP酶（PTPase）活性的改变，而形成蛋白质酪氨酸磷酸酶可能作为肿瘤抑制物的概念（Klarlund，J.K.（1985）Cell41∶707-717）。

虽然关于酪氨酸激酶的许多工作已集中在生长调节作用上，但最近中枢神经系统的非增殖细胞中的发现证明了相对大量的酪氨酸激酶活性的存在。例如，胰岛素的受体存在于脑的特定区域中，并在配体刺激后发生特异地自动磷酸化。目前已经证明，大鼠脑中胰岛素受体的分布是与磷酸酪氨酸的分布密切相关的，此提示这种激酶具有体内活性并参予成年动物中枢神经系统的功能（Moss，A.M.，Unger，J.W.，Moxley，R.T.and  Livingston，J.Proc.Natl.Acad.Sci.87∶4453-4457，1990）。

另一方面，最近已报导几种酪氨酸磷酸酶在中枢神经系统中得以选择性地表达，提示它们可能参予调节脑中的酪氨酸激酶活化作用。

如果这些酶参予控制酪氨酸磷酸化途径，则它们的活性可能是酪氨酸激酶的活性应在对特异性细胞过程或配体相互作用的反应中受到调节。确定，迄今已分离出的某些磷酸酶显示有假定的受体型结构，此提示它们的活性是受精细调节的级联过程中的外在配体调节的。很显然，酪氨酸磷酸化配体的分离可代表抑制不受控制的细胞生长（如在恶性增生情况下）的一个重要步骤。