[发明专利]新的抗肿瘤细胞激活素

说明书

本发明总地来说涉及细胞激活素。更具体地说，本发明涉及具有广泛抗肿瘤活性的新的细胞激活素。

细胞生长看来是由生长刺激和生长抑制分子之间的平衡来调节的。这些生长调节细胞激活素中的不平衡便认为是肿瘤生长的机制之一。

已有人就几种刺激肿瘤和正常细胞生长的细胞激活素作过描述。它们包括，例如，表皮生长因子(EGF)，成纤维细胞生长因子(FGF)，血小板衍生生长因子(PDGF)，胰岛索样生长因子(IGF)，白介素(IL)，菌落刺激因子(CSF)和转化生长因子(TGF-α和TGF-β)。

相反，其它细胞激活素则选择性地抑制某些肿瘤细胞的生长。它们包括，例如，干扰素(IFN)，淋巴细胞毒素(LT)，肿瘤坏死因子(TNF)，制瘤素M，两性边条曲霉索，白介素-1(IL-1)，白介素-6(IL-6)和TGF-β。

这些生长刺激和生长抑制细胞激活素，可以根据它们的来源，它们的抗肿瘤靶标特异性，它们的理化性质和它们的初生构造各自区分开来。因此，生长调节细胞激活素的鉴定和特征表述对理解细胞生长(包括肿瘤的生长)来说是非常重要的。

在本发明的一个实施方案中，提供了一种新的物质组合物。这种新的物质组合物，称作瘤抑制素(Oncoinhibin)，是由人体成红细胞样细胞分泌的，用SDS-PAGE测定具有约28KDa的分子量，并显示出多种抗肿瘤活性。

在本发明的一个实施方案中，提供了一种制备称为瘤抑制素的新的人细胞激活素的方法。该方法包含培养人体成红细胞样细胞，诱导瘤抑制素的产生和采集条件细胞上清液。

在本发明的另一个实施方案中提供了一种纯化人瘤抑制素的方法。该方法包括超滤含有人瘤抑制素的条件细胞上清液各步骤。随后在人瘤抑制素中进行并渗析该超滤上清液。依次进行DEAE Affigel蓝色谱，十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和反相高效液相色谱以纯化人瘤抑制素。

在本发明的另一个实施方案中，提供了一种用于激活淋巴细胞，单核细胞和中性白细胞以杀死肿瘤细胞的新的免疫调节剂，该新的免疫调节剂包含人瘤抑制素。也提供了一种用于刺激正常细胞生长的新的生长因子，这种新的生长因子包含人瘤抑制素。

在本发明的其它实施方案中提供了瘤抑制素的药用组合物和包含施用有效荆量的瘤抑制素的治疗肿瘤细胞的方法。

鉴于上面叙述的本发明的种种特征，优点，目的以及其它方面(它将变得很清楚)已面面俱到，且可获详细了解，而要将上面作简要归纳，对本发明作更具体的描述，则可以参照其在附图中说明的一些具体方案而行之。这些图构成本说明书的一部分。然而，应当提到，附图说明本发明的优选实施方案，因此它们不能被理解为对其范围的限制。它们在本发明中等同于实施方案而具相等效力。

图1说明K-563细胞条件上清液抑制MCF-7细胞的生长。

图2描述用于瘤抑制素的标准生物测定。

图3显示在有或无血清存在下由K-562产生瘤抑制素。

图4描述佛波醇酯对诱导瘤抑制素的作用。

图5显示超滤对瘤抑制素活性的作用。

图6显示经过凝胶渗透色谱对瘤抑制素的特征描述。

图7显示瘤抑制索活性物从SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳上洗脱。

图8描述瘤抑制素的SDS-PAGE分析。

图9显示瘤抑制素活性物从DEAE Affigel蓝(上图)和从Q琼脂糖柱(下图)上结合洗脱。

图10说明瘤抑制素和TNF的剂量依赖性抗繁殖作用。

图11显示瘤抑制素对正常人包皮成纤维细胞的剂量依赖性繁殖作用。

图12显示瘤抑制素对放线菌素D处理的鼠L-929细胞的作用。

图13显示经用和未用佛波醇酯处理两种情况下对K-562细胞的TNF和LT所作Northern印迹分析。

图14显示瘤抑制素(图A)和制瘤素M(图B)对人黑素瘤A375细胞的生长抑制作用的比较。

图15显示制瘤素M和IL-6对正常成纤维细胞的生长抑制作用。

图16显示IL-6对人乳房瘤(MCF-7)细胞的作用。

图17描述抗干扰素γ抗体对瘤抑制素活性在人乳房瘤细胞(MCF-7)上的影响。

图18显示在人包皮成纤维细胞上干扰素γ对TNF(上图)的抑制作用而对瘤抑制素(下图)则不具抑制作用。

图19显示在有或无瘤抑制素存在下人乳房瘤MCF-7细胞的生长率。

图20显示MCF-7细胞对瘤抑制素暴露时间的效果。

图21显示瘤抑制素对人乳房瘤MCF-7细胞的形态学的作用与TNF的比较。