[发明专利]通过悬浮培养再生棉花的方法

权利要求书

1.一种通过悬浮培养再生棉花的方法，其中

a)通过组织培养在含有葡萄糖的第一固体愈伤组织生长培养基中培养棉花外植体使愈伤组织生长足够时间，以便从可形成愈伤组织的外植体中分泌酚而形成胚发生愈伤组织；

b)酚的分泌结束后将愈伤组织转移至含有蔗糖作为碳源的第二固体愈伤组织生长培养基中并在第二固体生长培养基上将愈伤组织培养足够时间，使胚发生愈伤组织发育以产生至少一个胚；

c)将在含有蔗糖的第二固体愈伤组织生长培养基中形成的胚发生愈伤组织分成几块，且悬浮于含有蔗糖的液体愈伤组织生长培养基中并在所说的悬浮培养物中从所述愈伤组织发育成大小至少为600微米的胚发生块；

d)从液体愈伤组织生长培养基中回收大于600微米的胚发生块；

e)在植物萌发培养基中将大于600微米的胚发生块培养足够时间，以从这些胚发生块形成小植物。

2.权利要求1所述的方法，其中将小于600微米的胚发生块再悬浮于新鲜第二液体生长培养基中，以使胚发生块进一步生长。

3.权利要求1或2所述的方法，其中从悬浮液中移出大于800微米的胚发生块，以形成小植物。

4.权利要求1或2所述的方法，其中生长开始时的悬浮培养物为每8ml液体胚生长培养基中含有750-1000mg愈伤组织部分。

5.权利要求1或2所述的方法，其中外植体选自下胚轴、子叶及其混合物，以及未成熟的合子胚。

6.权利要求1或2所述的方法，其中至少胚发生愈伤组织通过在25-35℃的温度下，16小时光照和8小时无光的光照—无光交替条件下培养而发育的。

7.权利要求6所述的方法，其中光照期间的光强度为2,000—4,000勒。

8.权利要求6所述的方法，其中光照期间的光强度为3,000—4,000勒。

9.权利要求1或2所述的方法，其中在酚分泌结束之前，至少每隔10天更换一次含有葡萄糖的固体愈伤组织生长培养基。

10.权利要求1或2所述的方法，其中第一生长培养基是Murashige-Skoog氏培养基。

11.权利要求10所述的方法，其中第一生长培养基含有萘乙酸。

12.权利要求1或2所述的方法，其中第二固体愈伤组织生长培养基为Murashige-Skoog氏培养基。

13.权利要求1或2所述的方法，其中第二固体愈伤组织生长培养基为含有萘乙酸的Murashige-Skoog氏培养基。

14.权利要求13所述的方法，其中第二固体愈伤组织生长培养基含有大约1至5mg/l萘乙酸和0至1mg/l细胞分裂素。

15.权利要求1或2所述的方法，其中胚萌发培养基含有铵源。

16.权利要求14所述的方法，其中植物萌发培养基是富含氮源的Beasley-Ting氏培养基。

17.权利要求16所述的方法，其中胚萌发培养基为含有至多500mg/l的酪蛋白水解物及至多1200mg/l硝酸铵的Beasley-Ting氏培养基。