[发明专利]乌灵参深层发酵工艺

说明书

乌灵参〔Xylaria  nigripes（Klotzsch）Sau〕是一种珍贵的药用真菌，特别是用于治疗肝炎，改善免疫功能，促进生长，提高血红蛋白和降低尿素氮含量及抗肿瘤等功能。

乌灵参是一种野生的药用真菌，对治疗肝炎疗效显著。提取物具有抗肿瘤活性，增强细胞和体液免疫反应，并能促进生长发育，升高血红蛋白、降低血清尿素氮，其疗效好，且无任何毒副作用。现在国内外用于治疗肝炎的药物如三氮唑核苷，三唑核苷，阿唑核苷，阿糖腺苷，无环乌苷等，对人体有一定毒性，可能造成畸胎，抑制免疫系统，对急性及慢性乙肝疗效不明显。作为药用的乌灵参均为野生，自然资源极为稀少，价格昂贵，目前既没有人工栽培，也没有人工发酵，尚不能满足社会对防病治病的需要。

本发明的目的是运用生物工程的技术，通过人工深层发酵工艺的方法，来研制出控制病毒性肝炎的特效药物乌灵参，进行大规模的工业化生产，满足社会对防病治病的需要。

1、固体培养：培养基配方为葡萄糖20～25克，马铃薯200克、琼脂18～20克，水1升。培养条件为温度24～26℃，时间4～6天。在固体培养基上，乌灵参菌丝培养两天，首先在斜面上长出一层薄薄灰白色基生菌丝，再经过2～4天培养，在基生菌丝上面长出一层白色茂盛的气生菌丝体，因此在固体培养基上明显分为两层菌丝。菌丝具分技分隔，直径约为6～15μ，生长方式为二岐分技。

2、液体培养：培养基为葡萄糖20～30克，玉米粉15～25克，黄豆粉10～15克硫酸镁0.3～0.6克，PH5.0～6.30，水1000毫升，培养条件为温度24～26℃，转速100～150rpm，接种量2～3平方毫米的固体接种块10～20块/1000毫升，时间4～5天，培养基径1～1.2公斤/厘米²灭菌20～30分钟，冷却后接入固体菌种，置温度24～26℃，转速为100～150rpm的振荡器中培养，1～2天后，培养液中出现少量菌球，直径在0.2～0.4毫米，再经2～3天培养后，培养液中菌球密度逐渐增加，直径也在0.2～0.4毫米左右，培养液颜色逐渐由混浊变清，並有少量棉絮状的菌丝体出现，一直培养到培养液中充满菌球和棉絮状的菌丝体，液体变为清沏透明，並散发出一种特殊的香味，此时，菌丝体的收得率为1.0～1.2%。

3、发酵，培养基配方为葡萄糖20～30克，玉米粉15～25克，黄豆粉10～15克，硫酸镁0.3～0.6克，PH5.0～6.30，水1000毫米，消泡剂0.005～0.006%。培养条件：温度24～26℃，接种量5～10%，罐压0.3～0.5公斤/厘米²，时间4～5天，转速前期0～50rpm，后期0～150rpm，通气量前期为0.31～0.42升/升分，后期0.42～0.51升/升分。培养基径蒸气1～1.2公斤/厘米²灭菌20～30分钟，冷却后接入液体菌种为发酵液的5～10%的菌种，按上述培养条件进行培养，前期培养液中充满直径为0.2～0.4毫米的菌球，液体颜色混浊，后期培养液中充满直径为0.2～0.4毫米的菌球，並伴有少量的棉絮状的菌丝体出现，培养液变清，並从排气管中散发出乌灵参特有的香味。

乌灵参生于地下2～3米深遭破坏的白蚁巢中，故在自然界中极为珍贵，且产量极少，远不能满足社会的需求。本发明通过深层发酵的方法，实现了工厂规模化生产，能在较短的时间内获得大量的乌灵参菌丝体。另外，生产用的原料较为廉价，生产设备也为通用设备，具有投资少、见效快，产量高，价格便宜等优点。

实施例：

发酵设备为上海华东化工学院制造的MBF-Ⅲ-10多参数玻璃发酵罐。培养基配方为葡萄糖20～30克，玉米粉15～25克，黄豆粉10～15克，硫酸镁0.3～0.6克，PH5.0～6.30，水1000毫升，消泡剂0.005～0.006%。培养条件为温度24～26℃，接种量5～10%，罐压0.3～0.5公斤/平方厘米，时间4～5天，转速前期0～50rpm，后期0～150rpm，通气量前期0.31～0.42升/升分，后期0.42～0.51升/升分。按发酵罐的总容积的60～70%装入培养基，经蒸汽1～1.2公斤/平方厘米灭菌20～30分后，待冷却到24～26℃时，按培养液体积的5～10%接入液体菌种，罐压维持0.3～0.5公斤/平方厘米，经前期培养，培养液中的菌球数逐渐增多，並伴有少量的棉絮状的菌丝体出现，液体的颜色也渐渐变清。在后期培养中，菌球和絮状菌丝体大量增加，充满整个培养液，使培养液呈糊状，並散发出乌灵参特有的香味，此时取样测定总糖和氨基氮。放罐过滤菌丝体，菌丝体置80℃烘干即可。