[发明专利]由母体血液中分离胎儿细胞的方法来实现产前诊断

说明书

本发明涉及从妊娠哺乳动物血液中分离滋养层（胎盘）细胞的方法，以提供重要的起始材料即源于胎儿的细胞，以使获得胎儿的遗传和/或生物化学信息，更具体地，本发明涉及利用对哺乳动物滋养层上的膜蛋白标志特异的单克隆抗体从母体血液中分离出滋养层细胞。这些细胞然后可被用于获得妊娠初期胎儿的遗传和/或生物化学信息。本发明与检测人胎儿的异常特别有关。

目前，产前检查是用羊膜穿刺术或绒毛膜绒毛采样（CVS）得到的胎儿细胞实现的。羊膜穿刺一般在妊娠16周左右进行，该方法是由技术熟练人员把注射针刺入胎儿的羊膜囊内抽取20-30毫升的羊水，羊水中含有胎儿细胞，使以后的检查能实现。这种获取胎儿细胞的方法伴随着引起自发性流产的危险，此外，如果随后进行的胎儿的遗传诊断揭示出异常胎儿，中期三个月要进行妊娠中止既对母亲带来心理上的压力又伴随着某些生理上的危险。

绒毛膜绒毛采样也要求由技术熟练人员从妊娠8-12周胎儿的胎盘上取下一小块活组织，尽管任何染色体异常的早期诊断使得该方法比羊膜穿刺术更具有吸引力，但是这种方法也有可能造成自发性流产的危险。然而，需要技术熟练人员和这两种方法会造成自发性流产的可能性都表明现行的产前遗传评价法只能对被认为是可能怀有染色体缺陷的胎儿的妊娠妇女进行。

本发明的方法提供一种更为简单的方法，它包括从妊娠哺乳动物如孕妇的手臂静脉上抽取血液并提取胎儿细胞，这些细胞通常是从胎盘脱落到母体的循环血液中。获得这种血样不需要专门的专家，而且胎儿细胞的这种非侵入性的分离方法不存在引起自发性流产的危险。血液可以在与绒毛膜绒毛采样相同的妊娠时间被采取，因此，得到了早期诊断的好处。

虽然在母体外周血液中存在着滋养层细胞一直是一些争论的主题，如Goodfellow和Taylor（1982）已经报导了利用差示离心法提取在妊娠期外周血液中循环的滋养层细胞。Covone等人（1984）研究了用单克隆抗体H315（Johnson等，1981）从不同妊娠阶段孕妇的外周血液中探测滋养层细胞的可能性。然而，在以后的报导中（Pool等人，1987，Adinolfi等，1989）提出分离H315阳性细胞作为胎儿异常的出生前诊断的一种诊断材料来源是不现实的。最近的资料提出，在母体循环中的胎儿细胞的出现率（妊娠12-36周）低于十万分之一（Adinolfi等，1989，Schwinger等，1989）。

按照本发明的一个方面，提供了一种从妊娠母体的血样中分离滋养层细胞的方法，该方法包括使所说的血液与一有效结合量的绒毛合胞体滋养层和非绒毛细胞滋养层细胞的特异抗体接触一定的时间。所说的接触是在足以使所说的抗体结合到靶细胞上的条件下进行的，然后从所说的血样中分离由所说的抗体结合了的所说的细胞。

本发明的另一个方面是针对一种用于在妊娠哺乳动物中获得胎儿遗传和/或生物化学信息的方法，该方法包括从所说的妊娠哺乳动物体分离出一个血样，并使所说血样与一个结合有效量的绒毛合胞体滋养层和非绒毛细胞滋养层细胞特异抗体在足以使所说的抗体结合到所说的细胞上的条件下接触一段时间，然后从所说的血样中分离由所说抗体结合了的细胞，然后从该分离的细胞获得遗传和/或生物化学信息。

本发明的另一个方面涉及用于妊娠哺乳动物的血样中分离滋养层细胞的试剂盒，以及也可以是用于获取所说细胞的遗传和/或生物化学信息的试剂盒，它包括隔室形式的第一容器，该容器适合于容纳一种绒毛合胞体滋养层和非绒毛细胞滋养层细胞的特异抗体;一个可附加选择的第二容器，它适合于接收和放置来自所说的妊娠哺乳动物的血样;和一个可附加选择的第三个容器，它适合于容纳用于从被分离的细胞中获取遗传和/或生物化学信息的装置。

在本发明的一个最佳实施例中，哺乳动物是怀孕的妇女，并且使用抗体FDO    161G或FDO    66Q或FDO    338P中的一个或几个。

本发明还有一个方面是涉及这种均匀的或接近均匀的抗原，FDO    161G或FDO    66Q蛋白质和FDO    338P蛋白质，或者它们的衍生物。