[发明专利]用于检测人血清中HIV抗原的酶免疫测定法

说明书

本申请与1988年6月13日递交的未决中国专利申请88103625.0号（题目为“利用酶标免疫测定法同时检测人体中的抗原和/或抗体”）相关。且两个专利申请为同一申请人所拥有。

本发明提供了一种经过改进的免疫测定法，用于检测具有循环抗原的人生理液试验品中的HIV抗原。

本发明以一较好的实施方案提供了一独特的酶免疫测定法，它可用于检测HIV病毒、HIV病毒碎片或HIV感染细胞。该免疫测定法看情况所提供的阳性或阴性HIV抗原试验结果具有更高的精确度或灵敏性，一致性，且比迄今在HIV抗原测定中所花时间短。体现本发明的检测法利用了固相测定法，将特定针对某一HIV核心抗原的单克隆抗体包被到固体表面。

HILVⅢ感染，现在称作HIV感染，通常导致艾滋病（获得性免疫缺陷综合症）。已报道美国艾滋病患者的人数不断增加，其发病率接近于流行病，且无已知疗法或疫苗。艾滋病的发生主要在欧洲及非洲国家不断增加，它通过性行为、吸毒、在移植过程中的器官污染及输血而传染。其它HIV病毒株（如HTLV    IV）是通过该病毒的突变而产生的。

包括国家健康研究所（NIH）的科学家在内的研究人员已发展了一种单独测定HIV抗体或HIV抗原存在的试验。检测血浆和血清中的HIV抗体的测定法已得到可用于商业的临床认可。检测HIV抗原的测定法已知可用于研究，但就我们所知，并未获得可用于商业的临床许可。这些试验分别及独立地分析所选个体的血浆、血清或血细胞培养物上清液中的HIV抗原或与HIV抗原结合的人体HIV抗体含量，见Anti-HIV    Testing：Screening    and    Confirmation    Tests，Medical    Laboratory    Produits（April    1987，p    16-18），它是最近的一篇比较这几个单独试验的综述文章。

通过性交、输血、移植过程中污染器官或吸毒者使用被污染针头等途经，使70-80%的人因接触HIV病毒而产生人抗体。其余20-30%接触了该病毒的人在高达6个月的时间内未产生抗入侵病毒的抗体，他们可仍然是社会上的未被发现的带菌者。因此，如果为了控制艾滋病的蔓延而有效地筛选供血者及器管捐献者、个体或血液产品，那么筛选免疫测定法就必须不仅能够检测HIV抗体，而且还能够检测HIV病毒本身和/或带有该病毒的感染细胞。

目前的困难在于假阳性结果，它可能是由于非专一性抗体而产生的，也可能是针对于支持细胞培养物中抗原的抗体而产生的，该培养物是用于获得含有足量（如克服先有试验比所需灵敏性低的通常需要量）病毒颗粒的上清液。

体现本发明的测定法成功地用于病毒及病毒感染的细胞的测试。该测定法可在单个器皿如微滴定平板孔中进行。病人的试验样品最好包括人血浆（即最初除去所有细胞的全血）或血清（即除去全部凝固因子的血浆）。该测定法是通过酶免疫测定法（EIA）而按情况提供“阳性”或“阴性”结果。本发明所使用的鉴定艾滋病感染患者的测定法要比迄今所使用的仅追踪生理样品如外周血中的HIV抗体的免疫测定法合适得多。在大约4小时内就可获得试验结果。

对于仅确定抗HIV抗体而不能确定抗原存在的Western印迹技术而言，已知是在通过聚丙烯酰胺凝胶电泳扩散病毒蛋白（即抗原）之前溶解病毒浓缩物，以释放病毒蛋白，因此，在患者已被HIV感染而未产生抗体之前这段时间内，该技术无实用性。与此类似，对于仅用于筛选抗-HIV抗体而非抗原的酶联免疫吸附测定法，已知是用HIV病毒溶解物作为固相蛋白质粘附到固相支技物如由聚苯乙烯形成的微滴定平板上，它在HIV感染后而无抗体产生期间同样不具备实用性。但是，人们并未认识到在哺乳动物生物素化抗HIV抗体存在的情况下溶解与独特单克隆抗体包被的固相接触的人血液样品中的HIV能够提供象本发明一样相对迅速的，灵敏的定量测定单个试验样品中的HIV抗原的方法。