[发明专利]聚脱氧核苷酸的制备工艺

说明书

本发明涉及由化学性质限定的并可再制的聚脱氧核苷酸的制备。

更具体地说，本发明涉及了名为Defibrotide（DCI，Liste21，Chronique    OMS35，5Suppl.4，1981）的已知物质的制备。

名为Defibrotide的物质的定义为低分子量核苷酸馏分的钠盐，该物质由动物器官萃取得到，这在美国专利3，770，720和3，899，481中已经披露，公开的两篇专利在这里作为参考文献。

Defibrotide已是某些药理学和临床研究的课题，一方面其有可估计的很低的毒性（对急性或亚急性以及慢性病人），从用于治疗的观点出发其优点是不言而喻的，而另一方面，Defibrotide公开了惊人的并且完全料想不到的治疗性能。实际上正如已被列为本文参考文献的美国专利3，892，567所述，Defibrotide具有溶解纤维蛋白的活性，因此，它可用作抗血栓药。此外，药理学和临床实验研究（在自愿者身上进行）显示出下列活性：

a）治疗外围动脉病（发明者：O.N.Ulutin;美国专利申请号649055，申请日1984.9.10）;

b）治疗急性肾机能不全（发明者：V.Bonomini;美国专利4，649，134，批准日1987.3.10）;

c）治疗心收缩急性局部缺血（发明者：G.Prino，M.Mantovani，R.riada，美国专利申请号701，695，申请 日1985，2，14）。

所公布的上述专利和专利申请在本文中列为参考文献，以便说明其中公开的药物组合物及应用。

上述治疗应用的项目及重要性明显地将人们的注意力集中到了Defibrotide及其工业生产上。这项研究工作尤其与下列两方面有直接关系，一方面与进行经济上有利、技术上合理的大规模生产有关，每一方面与所得工业产品Defibrotide的控制和标准化有关。

另外，构成上述美国专利主题的工艺是最初的开发，这导致了名为Defibrotide的核苷酸结构的Obtention。

当药理学和临床研究的结果展现出初始离析物质的极其重要的和各种的性质时，显然，一方面面临着大规模生产的问题，另一方面要仔细考虑Defibrotide物质的化学和物理性质的研究，因为它们与生产和需求紧密相关。

Defibrotide完全符合上述药理学及治疗性能是本发明现已发现的首要特点，因此，它特别适合上述文献中的治疗应用。当核苷酸馏分形成时，其与下列无规则顺序的聚脱氧核苷酸化学式的化学计量相符，聚脱氧核苷酸的无规则化学式为：

式中：

p＝磷基

dAp＝脱氧腺苷酸的单体

dGp＝脱氧鸟苷酸的单体

dTp＝脱氧胸苷酸的单体

dCp＝脱氧胞苷酸的单体

与该化学式相应的Defibrotide还显示了下列化学物理性质：

-电泳现象＝均匀阳极流动性;

-消光系数，在260±1nm时，E^1%_1Cm＝220±10;

-消光比，E230/E260＝0.45±0.04;

-摩尔消光系数（以磷表示）ε（p）＝7.750±500;

-旋光本领〔α〕^20°_D＝53°±6;

-可逆增色性，用在天然DNA中的%表示，h＝15±5

可逆增色性是聚脱氧核苷酸的一个独特的光学性质，是衡量这些生物聚合物在溶液中分子重排能力的一个计量方法。

作为热力学状态函数来说，物质的分子趋向于无序自由活动，并且物质溶液的温度越高其运动速度也就越高。在大多数简单的、可溶性物质（如盐、糖、肽）中，当温度降低时，尽管分子运动速度降低，与初始条件相对照也没有发生分子重排。就生物聚合物来说，如聚脱氧核苷酸，其分子则趋向于相互重排。这个性质在双螺旋DNA中很明显，与初始条件相对照，其分子重排能力约为100%。这种重排能力的测量可用一种特殊方法进行，对于聚脱氧核苷酸来说，则测量其在260nm溶液中光密度（O.D）的变化值，该溶液被加热然后冷却，或使其呈碱性然后中和使其PH值为5。

增色性的测量值由下列公式计算出，

h＝ (O.D.（热或碱性PH值）)/(O.D.（室温或中和PH值）) -1

鉴于上述观点，该式还可定义为：