[发明专利]聚脱氧核苷酸的制备工艺

权利要求书

1、一种由原核酸溶液生产聚脱氧核苷酸Defibrotide的方法，上述溶液至少基本上没有多糖和蛋白质，上述方法包括：

(1)将碱金属的水溶性盐加入到原核酸的不溶性盐悬浮液中以溶解该核酸，除去所得悬浮液中不溶解的阳离子，连续地加入水溶性盐直到获得至少1摩尔原核酸的盐溶液。通过原核酸的稳定聚合形成高聚合切口的聚脱氧核苷酸，如果需要，溶液将调节到至少1摩尔预定值离子力并调节溶液pH值，直到达到最大可逆增色性为止：

(2)将所得到的溶液加热至上述聚脱氧核苷酸的解聚温度，从而解聚聚脱氧核苷酸直到溶液的可逆增色性在h=15±5数值为止，h值由在天然DNA的百分比测量，并维持溶液在解聚温度直到获得上述可逆增色值；

(3)用冷却溶液的方法停止解聚反应，调节解聚溶液pH值到大于7使双丝碎片中氢键断裂，以形成聚脱氧核苷酸的单丝碎片；以及

(4)将所得到的溶液加热到至少比解聚反应温度高5℃的温度及比解聚反应更高的pH值以稳定得到的聚脱氧核苷酸的单丝碎片以防止氢键重新形成。

2、根据权利要求1的方法，其中上述原核酸溶液由器官组织和哺乳动物细胞获得。

3、根据权利要求1的方法，其中连续加入水溶性盐直到上述原核酸的盐溶液至少是3摩尔。

4、根据权利要求1的方法，其中碱金属的水溶性盐选自卤化物和乙酸盐。

5、根据权利要求4的方法，其中所说盐为氯化钠。

6、根据权利要求5的方法，其中所说盐是3摩尔氯化钠溶液。

7、根据权利要求1的方法，其中通过连续补充盐水溶液，用切向流过滤膜在恒容条件分离过滤，以除去不溶性阳离子。

8、根据权利要求1的方法，其中上述过滤膜具有不高于100000的分子限定范围。

9、根据权利要求1的方法，其中用与可溶解盐的阴离子相当的酸来调节步骤1的pH值，该可溶解盐用于得到预定离子力的盐溶液。

10、根据权利要求9的方法，其中所说的酸是盐酸。

11、根据权利要求10的方法，其中通过加入盐酸使得溶液中的氢离子浓度与pH4-5相对应。

12、根据权利要求1的方法，其中在步骤1用1摩尔浓度的乙酸盐缓冲液达到与体系的最大可逆增色值相应的最终期望pH值。

13、根据权利要求12的方法，其中将稳定加热单丝碎片得到的溶液过滤并加入醇溶剂使最后产物沉淀。

14、根据权利要求13的方法，其中上述溶剂是乙醇。

15、根据权利要求1的方法，其中上述原核酸的盐溶液是通过溶胞产物研磨、加热蛋白水解的消化作用、过滤并浓缩制备，接着加入能够使磷酸盐沉淀的阳离子盐并在恒容条件下过滤沉淀悬浮液。

16、根据权利要求15的方法，其中蛋白水解的溶胞产物过滤是在切向流过滤膜上进行的。

17、根据权利要求16的方法，其中上述过滤膜的分子选择范围为50，000-100，000。

18、根据权利要求15的方法，其中用切向流过滤膜进行恒容过滤并连续补充水。

19、根据权利要求18的方法，其中所说过滤膜的孔径不大于0.45u。

20、根据权利要求15的方法，其中原料选自羊、猪、马和牛的肺、肠、肝及粘膜。

21、根据权利要求15的方法，其中原料选自白小体或其培养物的剩余物，精子、精母细胞或原始哺乳动物的细胞。

22、根据权利要求15的方法，其中原料是生产肝素，蛋白溶胞产物或器官提取物而加工动物器官或组织所得到的母液。

23、根据权利要求1的方法，其中步骤2的解聚反应是在大约70到75℃的温度下进行的。

24、根据权利要求1的方法，其中调节该溶液的pH值高于8。

25、根据权利要求1的方法，其中pH值用加入碱金属的氢氧化物来调节。

26、根据权利要求25的方法，其中上述碱金属氢氧化物是氢氧化钠。