[其他]制备一个新的人生理活性多肽

说明书

这个发明与编码新的人生理活性多肽之脱氧核糖核酸（这里和以后都称为DNA）有关。这个发明也与下列各点有关：含有DNA的可复制的重组DNA;用可复制的重组DNA转化微生物或细胞，通过DNA的表达得到新的有人生理活性的多肽，实质上是纯的有人生理活性并具有本发明所说的氨基酸顺序的多肽;有人生理活性的多肽的生产过程和通过重组DNA技术所生产的有人生理活性的多肽的纯化方法。更特别的是，本发明涉及到编码人肿瘤坏死因子（以后缩写成TNF）的DNA;人TNF具有的氨基酸顺序是从DNA的碱基顺序推引出来的，从利用重组DNA技术得来的DNA产生人TNF的过程和通过重组DNA技术所生产的人TNF纯化方法都与这个发明有关。

在本发明说明书中，用理论化学和应用化学国际协会-生物化学国际协会所审定的生化命名，如下面的缩写，是代表氨基酸和肽。顺便要说明的是，就氨基酸等具有的异构体而言，那些由下面缩写所代表的，除非另有说明，都是L-构型。

Gln：谷氨酰胺残基

Asp：天门冬氨酸残基

Pro：脯氨酸残基

Tyr：酪氨酸残基

Val：颉氨酸残基

Lys：赖氨酸残基

Glu：谷氨酸残基

Ala：丙氨酸残基

Asn：天门冬酰胺残基

Leu：亮氨酸残基

Phe：苯丙氨酸残基

Gly：甘氨酸残基

His：组氨酸残基

Ser：丝氨酸残基

Thr：苏氨酸残基

Ile：异亮氨酸残基

Trp：色氨酸残基

Arg：精氨酸残基

Met：甲硫氨酸残基

Cys：半胱氨酸残基

多聚脱氧核苷酸和寡聚脱氧核苷酸用脱氧核苷酸残基顺序来代表，脱氧核苷酸残基缩写如下：

A：2′-脱氧腺苷酸残基

C：2′-脱氧胞苷酸残基

G：2′-脱氧鸟苷酸残基

T：胸苷酸残基

除非有特殊说明，脱氧核苷酸顺序的左端是5′端。

具有刺激网状内皮系统的各种已知物质，例如具有抗肿瘤活性的有生理活性物质，它是由各种革兰氏阳性细菌和内毒素所诱导生成。确切地说，Carswell等发现从用卡介菌（BCG）感染的CD-1瑞士小鼠的血清和二星期后又用静脉注射内毒素的小鼠血清具有对培养的L细胞有细胞毒素活性;他也还发现一个现象，即在（BALB/CXC57BL/6）杂交子代小鼠（F₁）中它引起植入Meth A肉瘤的出血性坏死，他们给在血清中的这种活性物质名称为肿瘤坏死因子（TNF）〔参阅Proc·Nat·Acad·Sci·USA·Vol·72（No.9），PP·3666-3670（1975）〕。此后，Ruff等报告了按照由Carswell等所建议的上述方法制备的兔的肿瘤坏死因子（TNF）。并提纯得到约高于血清2000倍活性的TNF〔J·Immunol·，Vol·125（No.4），PP·1671-1677（1980）〕。以后，Metlhews等报告了兔子的TNF提纯得到约高于血清1000倍〔Br·J·Cancer，Vol·42，PP·416-422（1980）〕。然而，在Ruff等和Matthews等的报告中，提纯的TNF的肿瘤坏死效应并未在动物试验中确定。

日本专利申请书的公开说明书No.57-140725（1982）宣布分离和纯化有抗肿瘤活力的蛋白质类生理活性物质的过程。这种活性物质具有抗肿瘤活性，通过注射到哺乳类，例如小鼠、兔子、或豚鼠中，引起至少有一种物质具有刺激网状内皮系统的能力;然后再注射来自格兰氏阴性细菌的内毒素，或者把来自格兰氏阴性细菌的内毒素加入到含有哺乳类活化的巨噬细胞的组织培养物中。在这个日本专利申请书的公开说明书中，也公开了该纯化的蛋白质性的生理活性物质的分子量和等电点（分子量：39，000±5，000是用凝胶过滤或十二烷基磺酸钠-聚丙酰胺凝胶电泳进行测定;等电点为PH3.9±0.3是用等电聚焦法测定），但是没有该物质的任何详细结构。

同时，Matthews报告了他得到一种具有对L细胞有细胞毒素活性的物质，过程如下：用卡介菌注射兔子，在注射二星期后，从兔子各种组织得到单核吞噬细胞，接着又把内毒素加到单核吞噬细胞的细胞培养物中去〔Br·J·Cancer，Vol.44（3），PP·418-424（1981）〕。然而，在他的报告中，所得到物质的详细结构也没有公开，而且也没有证据说明他所得到的物质是与血清中所发现的TNF相同。