[发明专利]核酸组合物、目标微生物检测试剂盒及其应用

权利要求书

1.核酸组合物，其特征在于，包括目标微生物的核酸扩增引物，所述目标微生物包括扣囊复膜酵母、横梗霉和黄曲霉中的至少一种；

其中，所述扣囊复膜酵母的核酸扩增引物包括如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示序列的引物对；

所述横梗霉的核酸扩增引物包括如SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示序列的引物对；

所述黄曲霉的核酸扩增引物包括如SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示序列的引物对。

2.分离的核酸，其特征在于，所述分离的核酸包括权利要求1所述的核酸组合物的扩增片段；

可选地，所述分离的核酸为质粒。

3.权利要求1所述的核酸组合物和/或权利要求2所述的分离的核酸在制备目标微生物检测试剂盒中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述试剂盒用于执行以下方法中的任意一种：

实时荧光定量PCR和数字PCR。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述试剂盒中的组分满足以下特征(1)和(2)中的至少一个：

(1)所述试剂盒还包括DNA提取试剂和PCR反应试剂中的至少一种；

(2)所述分离的核酸的工作浓度为10³copies/μL～10¹²copies/μL。

6.根据权利要求3～5任一项所述的应用制备的试剂盒。

7.权利要求1所述的核酸组合物、权利要求2所述的分离的核酸、或者权利要求6所述的试剂盒在检测大曲质量或制备大曲中的应用。

8.一种检测大曲质量的方法，其特征在于，所述方法包括：

采用权利要求1所述的核酸组合物、权利要求2所述的分离的核酸、或者权利要求6所述的试剂盒检测待测大曲样本中的所述目标微生物，所述待测大曲样本为制曲阶段的大曲样本；

根据目标微生物的核酸含量确定待测大曲样本的大曲质量；

其中，所述制曲阶段包括大火阶段、晾霉阶段和后火阶段中的至少一种；

可选地，所述晾霉阶段包括晾霉I阶段和晾霉Ⅱ阶段中的至少一种。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，根据目标微生物的核酸含量确定待测大曲样本的大曲质量具体包括：

若待测大曲样本为晾霉Ⅱ阶段或后火阶段的大曲样本；

当扣囊复膜酵母的核酸含量大于4×10⁸copies/g时，确定所述待测大曲样本为优曲；

当扣囊复膜酵母的核酸含量小于1×10⁸copies/g时，确定所述待测大曲样本为次曲；

及/或

若待测大曲样本为大火阶段的大曲样本；

当横梗霉的核酸含量小于1×10¹¹copies/g时，确定所述待测大曲样本为优曲；

当横梗霉的核酸含量大于4×10¹¹copies/g时，确定所述待测大曲样本为次曲；

及/或

若待测大曲样本为晾霉I阶段的大曲样本；

当黄曲霉的核酸含量大于1×10⁷copies/g时，确定所述待测大曲样本为优曲；

当黄曲霉的核酸含量小于8×10⁶copies/g时，确定所述待测大曲样本为次曲；

可选地，所述大曲为清香型大曲。

10.一种大曲的制备方法，其特征在于，在制曲阶段，采用权利要求8或9所述的方法检测大曲的质量；

其中，所述制曲阶段包括大火阶段、晾霉阶段和后火阶段中的至少一种；

可选地，所述大曲为清香型白酒大曲；

可选地，所述晾霉阶段包括晾霉I阶段和晾霉Ⅱ阶段中的至少一种。