[发明专利]一种黄曲霉毒素B1的快速检测方法及试剂盒

权利要求书

1.一种黄曲霉毒素B1的检测体系，包括氯化血红素、生色底物和反应终止液，其特征在于组成成分还包括核酸适配体Aptamer、引发链T、发夹探针H1、H2、H3、H4、H5。

2.根据权利要求1所述的黄曲霉毒素B1检测体系，所述识别探针Aptamer的序列为表一SEQ ID No.1所示序列，所述引发链T的序列为表一SEQ ID No.2所示序列，所述H1的序列为表一SEQ ID No.3所示序列，所述H2的序列为表一SEQ ID No.4所示序列，所述H3的序列为表一SEQ ID No.5所示序列，所述H4的序列为表一SEQ ID No.6所示序列，所述H5的序列为表一SEQ ID No.7所示序列。

3.根据权利要求1所述的黄曲霉毒素B1检测体系，其特征在于所述生色底物为3,3',5,5'-四甲基联苯胺和过氧化氢。

4.根据权利要求1所述的黄曲霉毒素B1检测体系，其特征在于所述反应终止液为H₂SO₄溶液。

5.一种用于权利要求1所述黄曲霉毒素B1的检测体系的方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)所述核酸适配体Aptamer、引发链T、发夹探针H1、H2、H3、H4、H5分别在95℃退火处理5min；

(2)经步骤(1)处理的识别探针Aptamer与引发链T结合为Aptamer-T复合物；

(3)将待测样本加入经步骤(1)(2)处理的Aptamer-T复合物和发卡探针H1、H2、H3、H4、H5；

(4)将所述氯化血红素、3,3',5,5'-四甲基联苯胺和过氧化氢加入反应溶液；

(5)将所述反应终止液H2SO4加入反应溶液；

(6)紫外可见分光光度计测定450nm处吸光度。

6.根据权利要求4所述的黄曲霉毒素B1检测方法，其特征在于所述退火处理为95℃水浴下5min，缓慢冷却至室温。

7.根据权利要求1～5所述的黄曲霉毒素B1检测方法，其特征在于所述Aptamer-T复合物浓度为20nM、发夹探针H1、H2、H3浓度为30nM、发夹探针H4、H4浓度为150nM，所述氯化血红素浓度为300nM、3,3',5,5'-四甲基联苯胺、过氧化氢浓度均为200μM，所述反应终止液H₂SO₄浓度为2M。

8.一种用于权利要求1所述黄曲霉毒素B1检测方法的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括第一容器，所述第一容器内含所述识别探针Aptamer、引发链T；

所述试剂盒还包括第二容器，所述第二容器内含所述H1、H2、H3混合物；

所述试剂盒还包括第三容器，所述第三容器内含所述H4、H5混合物；

所述试剂盒还包括第四容器，所述第四容器内含所述氯化血红素hemin；

所述试剂盒还包括第五容器，所述第五容器内含所述3,3',5,5'-四甲基联苯胺、过氧化氢；

所述试剂盒还包括第六容器，所述第六容器内包含20mM的Tris-HCl缓冲溶液(120mMNaCl、10mM MgCl2、20mM KCl，pH＝7.4)。

所述试剂盒还包括第七容器，所述第七容器内含所述H₂SO₄溶液。

所述试剂盒还包括第八容器，所述第八容器包含所述25mM HEPES缓冲溶液(200mMNaCl、20mM KCl、1％DMSO、0.05％Triton X-100，pH＝7.4)。

9.一种黄曲霉毒素B1检测试剂盒的使用方法，其特征包括权利要求8所述的黄曲霉毒素B1检测试剂盒，还包括如下步骤：

(1)取第一容器中的溶液4μL、第二容器中的溶液9μL、第三容器中的溶液9μL、第四容器中的溶液3μL加入待测溶液中室温反应90min；

(2)加入第四所述容器中的溶液3μL，室温反应30min；

(3)加入第五所述容器中的溶液50μL，室温反应20min；

(4)加入第七所述容器中的溶液50μL；

(5)加入第六所述容器中的溶液75μL，紫外可见分光光度计测定450nm处吸光度。