[发明专利]一种YXT11菌株及生产黄原胶寡糖的方法

说明书

本发明公开了一种获得高效降解工业级黄原胶菌株YXT11的方法，属于生物技术领域。本发明包括如下步骤：(1)对XT11菌液用ARTP诱变仪处理90s后获得诱变菌株YXT11；(2)以菌株在发酵液中生产的还原糖浓度为指标，对诱变菌株YXT11进行筛选；(3)对获得的诱变菌株YXT11发酵降解黄原胶，可以大量提高产物黄原胶寡糖的含量(4)通过诱变使菌株获得了与野生型菌株不同的形态和降解能力。通过本发明的方法解决了野生型菌株对黄原胶利用率低，寡糖产率低等缺陷，同时不影响利用生物降解法获得高活性的黄原胶寡糖的优点，为黄原胶寡糖的工业化生产以及应用打下基础。

技术领域

本发明是涉及一种高效生产黄原胶寡糖的诱变YXT11菌株及其应用，属于微生物技术领域。

背景技术

黄原胶，又称单胞多糖、汉生胶，是一种由野油菜黄单胞菌(Xanthomonascampetris)分泌的胞外多糖，黄原胶是一种杂多糖，主要结构为重复戊多糖单元：两个葡萄糖单元、两个甘露糖单元、一个葡萄糖醛酸单元，摩尔比为2.8：2.0：2.0。黄原胶主链化学结构与纤维素相同，侧链末端甘露糖连接有丙酮酸，黄原胶分子量分布范围在2×10⁶至2×10⁷之间，黄原胶寡糖(Xanthan oligosaccharide)是由XT11菌株降解黄原胶所产生的胞外寡糖。黄原胶寡糖目前已经被证实有抗氧化活性、清除自由基、抗菌活性以及抗癌抗肿瘤活性，在生物医药以及食品领域具有广泛的用途。

目前黄原胶寡糖的生产方式有化学合成法，酶降解法，生物降解法等，其中化学合成法合成条件严格，副反应多且合成所需要大量的酶进行催化反应；酶降解法对酶活性要求较高，反应产物量较少；生物降解法反应具有操作方便，反应条件简单，产物产量较高等特点。生物降解法是通过XT11菌株作用于黄原胶发酵来生产DP为2-8的黄原胶寡糖。目前用生物降解法来生产黄原胶寡糖产量收率一般在0.25g/L～0.3g/L，通过对发酵条件的优化可以使寡糖产量提高到0.28g/L～0.34g/L。但是该产率依旧不能满足工业生产的需求，因此通过诱变来增强XT11菌株降解黄原胶的能力，增大黄原胶寡糖的产量具有重大的生产意义。经检索，目前国内外还没有通过诱变处理以达到增大黄原胶寡糖产量的育种筛选方法和利用该方法生产黄原胶寡糖的工艺。

发明内容

本发明针对现有黄原胶寡糖的生产行业中利用菌株降解黄原胶来生产黄原胶寡糖产量较低的问题，提供了一种高效生产黄原胶寡糖的诱变菌株以及应用，具体涉及一种利用XT11菌株经过定向进化和诱变筛选获得能高产黄原胶寡糖的菌株，菌种编号为以及利用该诱变菌高效生产黄原胶寡糖的方法。

一种高效生产黄原胶寡糖的YXT11菌株，其分类属于微杆菌属，分类命名为：微杆菌属YXT11(Microbacterium sp.YXT11)，该菌株已经于2022年10月26日由中国典型培养物保藏中心登记入册，该保藏中心于2022年11月02日检测完毕，为存活，，保藏编号为CCTCCNO：M 20221662，保藏单位地址为中国.武汉.武汉大学。

本发明所述的黄原胶降解杆菌YXT11是由黄原胶降解菌XT11^[1][2]经过诱变筛选获得的。[1]Yang F,Li H,Sun J,Guo X,Zhang X,Tao M,Chen X,Li X.Novel EndotypeXanthanase from Xanthan-Degrading Microbacterium sp.Strain XT11.Appl EnvironMicrobiol.2019Jan 9；85(2)

[2]Sun Z,Liu H,Wang X,Yang F,Li X.Proteomic Analysis of the Xanthan-Degrading Pathway of Microbacterium sp.XT11.ACS Omega.2019Nov 6；4(21)

本发明黄原胶降解菌YXT11的诱变以及筛选方法为：