[发明专利]慢病毒载体LentilAlpha在制备治疗α-地中海贫血药物中的应用

说明书

本发明公开了一种慢病毒载体LentilAlpha在制备治疗α‑地中海贫血药物中的应用，所述慢病毒载体包括pCCL‑SIN‑cPPT‑MCS‑RbPA骨架和顺次连接的A调控序列、第一α‑globin表达盒与第二α‑globin表达盒。本发明慢病毒载体LentiAlpha增强了α‑珠蛋白基因的特异性高表达，降低了载体大小从而提高了病毒包装效率；在LentiAlpha转导的HBA KO小鼠胎肝单个核细胞体外红系分化中能检测到人α‑珠蛋白的表达。慢病毒载体LentiAlpha能挽救HBA KO小鼠胎肝细胞造血重建的小鼠致死表型，并在小鼠外周血中检测到人α‑珠蛋白的表达。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种慢病毒载体LentilAlpha在制备治疗α-地中海贫血药物中的应用。

背景技术

地中海贫血是一种世界上最常见的单基因常染色体隐性遗传性疾病，以小细胞低色素性贫血为特征，流行于地中海国家、东南亚、非洲、中东和印度。

α-地中海贫血是由于α-珠蛋白基因突变或缺失致使α-珠蛋白生成减少或缺如，最终导致溶血性贫血。正常人的α-珠蛋白合成是由16号染色体（16p13.3）上4个α-珠蛋白基因（每条染色体上有2个α-珠蛋白基因，α1和α2）调控的，这种基因型通常被写为αα/αα。在胎儿和成人的血红蛋白合成中α-珠蛋白链都是必不可少的。不平衡的交叉或重组引起大的α-珠蛋白基因片段缺失，从而导致α-地中海贫血综合症，但少数是由于突变引起的。α-地中海贫血分为缺失型和非缺失型。据估计，全球约5%的人口携带至少一个α-珠蛋白基因变异。

α-地中海贫血临床表现包括从几乎无症状，到轻度的小细胞低色素性贫血，直到致死的溶血性贫血。临床表型严重程度与四个α-珠蛋白基因变异的拷贝数直接相关。一个α-珠蛋白基因缺失（-α/αα）称为“静止型α-地中海贫血”。两个α-珠蛋白基因缺失（--/αα或-α/-α）就是通常所说的 “轻型α-地中海贫血”，表现为小细胞增多与血红蛋白减少，但很少出现贫血症状（一般无贫血）。上述这两种情况通常不需要治疗。三个α-珠蛋白基因缺失（--/-α）导致HbH (β4)血红蛋白的大量产生，也被称为“HbH病” ，表现为低色素性中重度溶血性贫血和脾肿大。缺失型的HbH病患者需要间歇性的输血治疗，尤其在疾病间歇发作的时候，但是有些患者也需要定期的输血治疗。四个α-珠蛋白基因全部缺失（--/--）导致HbBart’s (γ4) 血红蛋白的产生，个体无任何α-珠蛋白表达，导致胎儿水肿和新生儿阶段的死亡，被称为“Hb Bart’s胎儿水肿综合症”。中国南方最常见的缺失类型是东南亚缺失（--^SEA）。

非缺失型α-地中海贫血是由α-珠蛋白基因突变导致的α珠蛋白基因缺陷 (α^T) 所致。非缺失型突变能够生成不稳定的血红蛋白，通常沉淀在红细胞内，形成不溶的包涵体，对红细胞有较强的破坏作用而导致溶血性贫血。中国南方常见的非缺失类型是HbConstant Spring (HbCS)、Hb Quong Sze (HbQS) 和 Hb Westmead (HbWS)。HbCS是最普遍的非缺失型突变，高发于中国和部分东南亚国家。

非缺失型α-地中海贫血的临床表现多种多样，通常比缺失型α-地中海贫血更加严重。非缺失型“HbH病”（--/α^Tα）患者经常从童年开始就有严重的贫血，脾肿大，铁负载，以及各种各样的临床并发症，包括感染，腿溃疡，胆结石，叶酸缺乏，血栓。在我国，HbH病中HbCS(--^SEA/α^CSα)、HbQS (--^SEA/α^QSα) 和 HbWS (--^SEA/α^WSα) 约占总数的30%，患者除了依靠长期输血或者骨髓移植治疗外，无任何治疗手段，难度及费用与输血依赖性β-地中海贫血的治疗相当。