[发明专利]一种枯草芽孢杆菌发酵分级产物及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种枯草芽孢杆菌发酵分级产物的制备方法，包括以下步骤，步骤1)制备发酵培养基；步骤2)将枯草芽孢杆菌菌种接入步骤1)的发酵培养基中；步骤3)将种子液接种到发酵培养基中进行发酵，得到发酵液；步骤4)菌液分离；步骤5)对发酵液进行分级分离，收集得到不同分子量范围的多种发酵产物，分别为分子量大于10000Da的发酵产物A、分子量6000Da‑10000Da的发酵产物B、分子量为2000Da‑6000Da的发酵产物C以及分子量为100Da‑2000Da的发酵产物D，本发明通过分离工艺技术分步骤、分阶段收集不同分子量范围的组分，得到具有不同功效的四种发酵产物。而且本发明通过分离工艺技术，最终实现透过液经检测水质达到发酵用水标准，可回收用于下批次菌种发酵培养基的配置。

技术领域

本发明涉及枯草芽孢杆菌发酵领域。更具体地说，本发明涉及一种枯草芽孢杆菌发酵分级产物及其制备方法和应用。

背景技术

我国心血管疾病现状异常严峻，患病人数超过4.5亿人，其中血栓性疾病、高血压、高血脂等都是严重的心血管疾病，严重影响人民的生命健康和生活质量。但是，目前临床用药都已小分子化学药物为主，长期服用会有各种毒副作用，缺乏安全有效的功能食品和药物。

发明内容

为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，一方面，本发明的一优选实施方案提供了一种枯草芽孢杆菌发酵分级产物的制备方法，包括以下步骤：

步骤1)制备发酵培养基；

步骤2)制备种子液

将枯草芽孢杆菌菌种接入步骤1)的发酵培养基中，并于35-40℃，100-500r/min摇床振荡培养15-20h，得到种子液；

步骤3)接种发酵

将步骤2)得到的种子液按照1％-5％的接种量接种到发酵培养基中进行发酵，得到发酵液；

步骤4)菌液分离

待发酵结束，将步骤3)得到的发酵液进行分离得到菌体和发酵液；

步骤5)发酵液分级收集

对步骤4)得到的发酵液进行分级分离，收集得到不同分子量范围的多种发酵产物，分别为分子量大于10000Da的发酵产物A、分子量6000Da-10000Da的发酵产物B、分子量为2000Da-6000Da的发酵产物C以及分子量为100Da-2000Da的发酵产物D。

优选地，所述步骤3)中的发酵条件为：发酵时长18-22h，发酵温度36-38℃，发酵环境中溶氧量为20-40％。

优选地，所述步骤1)中，所述发酵培养基中包含质量分数1％-5％的氮源、质量分数2％-4％的葡萄糖以及质量分数0.01％-0.1％的硫酸钙。

优选地，所述氮源采用大豆成分，包括但不限于大豆粉、大豆粕粉、大豆蛋白粉、大豆蛋白胨、大豆肽粉。

优选地，所述步骤2)中，所述枯草芽孢杆菌菌种在使用前，用新鲜的斜面活化18-24h，再从斜面上挑取一环枯草芽孢杆菌菌体用于接种。

优选地，所述步骤5)中，所述将步骤4)得到的发酵液通过分离工艺分离收集得到不同分子量范围的多种发酵产物，具体包括：

将发酵液通过10000Da分离膜超滤设备进行浓缩得到浓缩液A，浓缩液A通过真空冷冻干燥或喷雾干燥得到分子量大于10000Da的发酵产物A；

将上一步10000Da分离膜超滤得到的透过液通过6000Da分离膜超滤设备进行浓缩得到浓缩液B，浓缩液B通过真空冷冻干燥或喷雾干燥得到分子量6000Da-10000Da的发酵产物B；