[发明专利]一种枯草芽孢杆菌发酵分级产物及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种枯草芽孢杆菌发酵分级产物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1)制备发酵培养基；

步骤2)制备种子液

将枯草芽孢杆菌菌种接入步骤1)的发酵培养基中，并于35-40℃，100-500r/min摇床振荡培养15-20h，得到种子液；

步骤3)接种发酵

将步骤2)得到的种子液按照1％-5％的接种量接种到发酵培养基中进行发酵，得到发酵液；

步骤4)菌液分离

待发酵结束，将步骤3)得到的发酵液进行分离得到菌体和发酵液；

步骤5)发酵液分级收集

对步骤4)得到的发酵液进行分级分离，收集得到不同分子量范围的多种发酵产物，分别为分子量大于10000Da的发酵产物A、分子量6000Da-10000Da的发酵产物B、分子量为2000Da-6000Da的发酵产物C以及分子量为100Da-2000Da的发酵产物D。

2.根据权利要求1所述的枯草芽孢杆菌发酵分级产物的制备方法，其特征在于，所述步骤1)中，所述发酵培养基中包含质量分数1％-5％的氮源、质量分数2％-4％的葡萄糖以及质量分数0.01％-0.1％的硫酸钙。

3.根据权利要求2所述的枯草芽孢杆菌发酵分级产物的制备方法，其特征在于，所述氮源采用大豆成分。

4.根据权利要求1所述的枯草芽孢杆菌发酵分级产物的制备方法，其特征在于，所述步骤3)中的发酵条件为：发酵时长18-22h，发酵温度36-38℃，发酵环境中溶氧量为20-40％。

5.根据权利要求1所述的枯草芽孢杆菌发酵分级产物的制备方法，其特征在于，所述步骤2)中，所述枯草芽孢杆菌菌种在使用前，用新鲜的斜面活化18-24h，再从斜面上挑取一环枯草芽孢杆菌菌体用于接种。

6.根据权利要求1所述的枯草芽孢杆菌发酵分级产物的制备方法，其特征在于，所述步骤5)中，所述将步骤4)得到的发酵液通过分离工艺分离收集得到不同分子量范围的多种发酵产物，具体包括：

将发酵液通过10000Da分离膜超滤设备进行浓缩得到浓缩液A，浓缩液A通过真空冷冻干燥或喷雾干燥得到分子量大于10000Da的发酵产物A；

将上一步10000Da分离膜超滤得到的透过液通过6000Da分离膜超滤设备进行浓缩得到浓缩液B，浓缩液B通过真空冷冻干燥或喷雾干燥得到分子量6000Da-10000Da的发酵产物B；

将上一步6000Da分离膜超滤得到透过液通过2000Da分离膜超滤设备进行浓缩得到浓缩液C，浓缩液C通过真空冷冻干燥或喷雾干燥得到分子量2000Da-6000Da的发酵产物C；

将上一步2000Da分离膜超滤的透过液通过100Da分离膜超滤设备进行浓缩得到浓缩液D，并将浓缩液D通过真空冷冻干燥或喷雾干燥得到分子量100Da-2000Da的发酵产物D。

7.根据权利要求6所述的枯草芽孢杆菌发酵分级产物的制备方法，其特征在于，所述步骤5)中，经由100Da分离膜超滤设备浓缩后的透过液可用于配置发酵培养基。

8.一种根据权利要求1-7任一所述的枯草芽孢杆菌发酵分级产物的制备方法制备得到的枯草芽孢杆菌发酵分级产物，其包括分子量大于10000Da的发酵产物A、分子量6000Da-10000Da发酵产物B、分子量2000Da-6000Da发酵产物C以及分子量100Da-2000Da发酵产物D。

9.一种根据权利要求8所述的枯草芽孢杆菌发酵分级产物的应用，其中，发酵产物A在制备辅助溶栓的保健食品或治疗溶栓的药品上的应用，发酵产物B在制备提高免疫力的保健食品或药品上的应用，发酵产物C在制备辅助降血压的保健食品或治疗降血压的药品上的应用，发酵产物D在制备辅助降血脂和治疗脂肪肝的保健食品或治疗高血脂和治疗脂肪肝的药品上的应用。