[发明专利]一种基于可视化RT-LAMP的冻干型新型冠状病毒检测试剂盒

说明书

本发明提供一种新型冠状病毒检测RT‑LAMP引物组及基于可视化RT‑LAMP的冻干型新型冠状病毒检测试剂盒，所述引物组包括内引物FIP、BIP，外引物F3、B3，以及环引物LF、LB；所述内引物FIP、BIP的核苷酸序列如SEQ ID NO:1‑2所示；所述外引物F3、B3的核苷酸序列如SEQ ID NO:3‑4所示；所述环引物LF、LB的核苷酸序列如SEQ ID NO:5‑6所示。所述试剂盒包括RT‑LAMP反应液、阳性对照、阴性对照、复溶液。该试剂盒用于检测新型新型冠状病毒的特异性和灵敏度高。

技术领域

本发明涉及一种基于可视化RT-LAMP的冻干型新型冠状病毒检测试剂盒，属于新冠病毒核酸检测技术领域。

背景技术

冠状病毒是一个大型病毒家族，已知可引起感冒、中东呼吸综合征(MERS)和严重急性呼吸综合征(SARS)等较严重疾病。新型冠状病毒(2019-nCoV)是以前从未在人体中发现的冠状病毒新毒株，是已知的第7种可以感染人的冠状病毒。

新型冠状病毒是一种具有包膜的正链RNA病毒，主要特点是人际传播、繁殖速度快、传播率高、变异快，与其他呼吸道病毒合并感染会导致临床诊断难度增加。人感染了冠状病毒后的常见体征有常见呼吸道症状、发热、咳嗽、气促和呼吸困难等。在较严重病例中，感染新型冠状病毒可导致肺炎、严重急性呼吸综合征、肾衰竭，甚至死亡。

根据国内外新型冠状病毒的诊断指南和检测技术的研究，其检测方法主要包括病原体分离培养检测、核酸扩增检测、测序、免疫学检测等。

逆转录环介导恒温扩增(RT-loop-mediated isothermal amplification，RT-LAMP)是在60～65℃的恒温条件下，利用耐高温逆转录酶、链置换DNA聚合酶和针对靶基因6～8个区域设计的4～6条引物即可实现对RNA进行快速高效扩增的检测技术。比色法RT-LAMP(colorimetric RT-LAMP，cRT-LAMP)是指反应前在体系中加入可视化染料，通过观察RT-LAMP反应前后的颜色变化差异实现快速判读反应结果的核酸扩增技术。cRT-LAMP可以实现样本的快速检测，为基层密切接触者、疑似病例的快速筛查和处置提供方法和手段。

但是，现有技术中的检测新型冠状病毒cRT-LAMP的试剂的检测的特异性和灵敏度还不够理想。

发明内容

本发明提供了一种基于可视化RT-LAMP的冻干型新型冠状病毒检测试剂盒，可以有效解决上述问题。

本发明是这样实现的：

第一方面，本发明提供一种新型冠状病毒检测RT-LAMP引物组，包括内引物FIP、BIP，外引物F3、B3，以及环引物LF、LB；所述内引物FIP、BIP的核苷酸序列如SEQ ID NO:1-2所示；所述外引物F3、B3的核苷酸序列如SEQ ID NO:3-4所示；所述环引物LF、LB的核苷酸序列如SEQ ID NO:5-6所示。

作为进一步改进的，所述内引物、外引物、环引物的摩尔比为8：1：2。

第二方面，本发明提供一种新型冠状病毒检测RT-LAMP反应液，包括上述的引物组、RT-LAMP Buffer、酶Mix；所述酶Mix包括Bst DNA聚合酶、耐高温逆转录酶、RNA酶抑制剂。

作为进一步改进的，所述RT-LAMP Buffer包括(NH₄)₂SO₄、MgSO₄、KCl、DTT、dNTPs、酚红。

作为进一步改进的，还包括冻干保护剂，所述冻干保护剂包括6wt％蔗糖、2wt％山梨醇、6wt％PEG20000、3wt％PVP K30，其余为DEPC水。