[发明专利]一种基于可视化RT-LAMP的冻干型新型冠状病毒检测试剂盒

权利要求书

1.一种新型冠状病毒检测RT-LAMP引物组，其特征在于，包括内引物FIP、BIP，外引物F3、B3，以及环引物LF、LB；所述内引物FIP、BIP的核苷酸序列如SEQ ID NO:1-2所示；所述外引物F3、B3的核苷酸序列如SEQ ID NO:3-4所示；所述环引物LF、LB的核苷酸序列如SEQ IDNO:5-6所示。

2.根据权利要求1所述的新型冠状病毒检测RT-LAMP引物组，其特征在于，所述内引物、外引物、环引物的摩尔比为8：1：2。

3.一种新型冠状病毒检测RT-LAMP反应液，其特征在于，包括权利要求1或2所述的引物组、RT-LAMP Buffer、酶Mix；所述酶Mix包括Bst DNA聚合酶、耐高温逆转录酶、RNA酶抑制剂。

4.根据权利要求3所述的新型冠状病毒检测RT-LAMP反应液，其特征在于，所述RT-LAMPBuffer包括(NH₄)₂SO₄、MgSO₄、KCl、DTT、dNTPs、酚红。

5.根据权利要求3所述的新型冠状病毒检测RT-LAMP反应液，其特征在于，还包括冻干保护剂，所述冻干保护剂包括6wt％蔗糖、2wt％山梨醇、6wt％PEG20000、3wt％PVP K30，其余为DEPC水。

6.一种权利要求5所述的新型冠状病毒检测RT-LAMP反应液的冻干方法，其特征在于，将所述的新型冠状病毒检测RT-LAMP反应液进行分装后进行冻干，所述冻干的冻干曲线参数为：

预冻阶段：-50℃，2h；

升华干燥：-40℃，0.5h，真空度10Pa；-40℃，10h，真空度10Pa；

解析干燥：-30℃，0.5h，真空度10Pa；-20℃，0.5h，真空度10Pa；-10℃，0.5h，真空度10Pa；0℃，0.5h，真空度10Pa；10℃，2h，真空度10Pa；20℃，4h，真空度10Pa。

7.一种基于可视化RT-LAMP的冻干型新型冠状病毒检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求3至5任一项所述的RT-LAMP反应液、阳性对照、阴性对照、复溶液。

8.一种根据权利要求7所述的基于可视化RT-LAMP的冻干型新型冠状病毒检测试剂盒，其特征在于，所述阳性对照为新型冠状病毒N基因片段质粒。

9.一种权利要求7或8所述的基于可视化RT-LAMP的冻干型新型冠状病毒检测试剂盒的使用方法，其特征在于，向RT-LAMP反应液加入复溶液，以复溶冻干试剂，然后依次加入处理后的待测样本核酸、阴性对照、阳性对照，混匀，进行RT-LAMP反应扩增，反应结束后，观察反应管内液体的颜色变化，根据颜色变化进行结果判定。

10.根据权利要求9所述的使用方法，其特征在于，所述RT-LAMP反应的反应温度为63-65℃，反应时间为28-32min。