[发明专利]小鼠胚胎组织芯片免疫荧光染色试剂盒

权利要求书

1.一种小鼠胚胎组织芯片免疫荧光染色试剂盒，其特征在于，

包括五个小鼠胚胎组织芯片和免疫荧光染色试剂耗材，

所述免疫荧光染色试剂耗材包括免疫染色通透液、固定液、免疫染色一抗稀释液、洗涤液、封闭液、免疫荧光染色二抗稀释液、抗荧光淬灭封片液、免疫荧光染色二抗、免疫荧光染色一抗、山羊血清和盖玻片；

所述小鼠胚胎组织芯片的制备方法包括：

选择适龄雌雄小鼠数只，检查小鼠外部生殖器官情况和动情期；

按雌雄比例2:1或者1:1配笼饲养，得到多只孕鼠；

选取胚龄7.5d-18.5d的孕鼠，脱颈处死，剖开腹腔，分离粘膜，剪断子宫颈，在显微镜辅助下在滤纸上沿子宫侧轴将子宫剪开，剥离蜕膜分离鼠胚，得到12种不同周期的鼠胚；

利用方形孔板，固定组织，采集12种不同周期的鼠胚，并按照矢状面、冠状面和横断面排列在受体空白石蜡块中，制成石蜡组织芯片蜡块；

对所述石蜡组织芯片蜡块进行切片后放置玻片上，得到小鼠胚胎组织芯片。

2.如权利要求1所述的小鼠胚胎组织芯片免疫荧光染色试剂盒，其特征在于，

所述免疫荧光染色二抗包括免疫荧光染色二抗-抗大鼠Cy3、免疫荧光染色二抗-抗人FITC、免疫荧光染色二抗-抗山羊Cy3、免疫荧光染色二抗-抗兔Alexa Fluor 350、免疫荧光染色二抗-抗兔Alexa Fluor 488、免疫荧光染色二抗-抗兔Alexa Fluor 555、免疫荧光染色二抗-抗兔Alexa Fluor 647、免疫荧光染色二抗-抗兔Cy3、免疫荧光染色二抗-抗兔FITC、免疫荧光染色二抗-抗小鼠Alexa Fluor488、免疫荧光染色二抗-抗小鼠Alexa Fluor555、免疫荧光染色二抗-抗小鼠Alexa Fluor 647、免疫荧光染色二抗-抗小鼠AlexaFluor350、免疫荧光染色二抗-抗小鼠Cy3和免疫荧光染色二抗-抗小鼠FITC中的任意一种或两种。

3.如权利要求2所述的小鼠胚胎组织芯片免疫荧光染色试剂盒，其特征在于，

所述小鼠胚胎组织芯片包括小鼠胚胎组织石蜡芯片和小鼠胚胎组织冰冻芯片中的任意一种。

4.如权利要求3所述的小鼠胚胎组织芯片免疫荧光染色试剂盒，其特征在于，

所述固定液包括免疫染色固定液和4％多聚甲醛固定液中的任意一种；

所述洗涤液包括免疫染色洗涤液和缓冲洗涤液；

所述封闭液包括免疫染色封闭液和缓冲封闭液。

5.如权利要求4所述的小鼠胚胎组织芯片免疫荧光染色试剂盒，其特征在于，

所述缓冲洗涤液的制备方法包括：

称取24.2g的三羟甲基氨基甲烷和80g氯化钠混合，得到混合溶液；

使用盐酸将所述混合溶液的pH至调节至7.6，得到调整溶液；

将1升的所述调整溶液按照1:9的比例用水稀释，得到三乙醇胺缓冲盐水溶液；

使用非离子型去垢剂将所述三乙醇胺缓冲盐水溶液的最终浓度调整为0.1％，得到缓冲洗涤液。

6.如权利要求5所述的小鼠胚胎组织芯片免疫荧光染色试剂盒，其特征在于，

所述缓冲封闭液的制备方法包括：

在100毫升的TBST缓冲液中加入5克山羊血清，溶解并混匀，得到缓冲封闭液。

7.如权利要求6所述的小鼠胚胎组织芯片免疫荧光染色试剂盒，其特征在于，

所述小鼠胚胎组织石蜡芯片的免疫荧光染色方法包括：

对所述小鼠胚胎组织石蜡芯片依次进行脱蜡、水化和抗原修复，得到脱蜡芯片；

用所述固定液固定所述脱蜡芯片固定10分钟；

使用所述洗涤液洗涤所述脱蜡芯片3次，每次3-5分钟，直至将所述脱蜡芯片上的所述固定液去除；

使用所述封闭液将洗涤后的所述脱蜡芯片封闭60分钟；

使用所述免疫染色一抗稀释液将所述免疫荧光染色一抗稀释至预设浓度，得到稀释一抗；

用所述稀释一抗去除所述脱蜡芯片上的所述封闭液60分钟；

用所述洗涤液洗涤所述脱蜡芯片3-5次，每次3-5分钟，去除所述脱蜡芯片上的所述封闭液；

用所述免疫荧光染色二抗稀释液按照1:1000的比例稀释所述免疫荧光染色二抗，得到稀释二抗；

使用所述稀释二抗对所述脱蜡芯片避光孵育60分钟，去除所述脱蜡芯片上的所述洗涤液；

回收所述稀释二抗，用所述洗涤液洗涤孵育后的所述脱蜡芯片3-5次，每次3-5分钟，得到封片芯片；

将所述封片芯片避光储存，使用所述使用抗荧光淬灭封片液滴加在所述封片芯片上，并使用所述盖玻片盖于所述封片芯片上后，在荧光显微镜或共聚焦显微镜下观察所述封片芯片的小鼠胚胎组织染色状况，拍照以获取小鼠胚胎组织染色图像和数据。