[发明专利]猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白及其制备方法和用途、基因、试剂盒和检测方法

权利要求书

1.一种猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白，其特征在于，所述GP5蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。

2.一种用于编码如权利要求1所述的猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白的基因，其特征在于，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

3.一种猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白抗体间接ELISA检测试剂盒，其特征在于，包括预包被板，所述预包被板中被包被的蛋白为如权利要求1所述的猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白。

4.根据权利要求3所述的检测试剂盒，其特征在于，还包括样本稀释液、酶标抗体、TMB底物液、终止液、浓缩洗涤液以及封板膜、稀释板、阴性对照、阳性对照；

所述的阳性对照液由样品稀释液稀释的猪阳性血清配制而成；所述的阴性对照液由样品稀释液稀释的猪阴性血清配制而成。

5.根据权利要求3所述的检测试剂盒，其特征在于，所述预包被板的制备方法为：

1）抗原稀释：将猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白用包被液稀释至1μg/mL得到稀释液；

2）包被标板：ELISA板的每孔加100μL稀释后浓度为1μg/mL抗原稀释液，在4°C的条件下放置8h～12h；

3）封闭：取出包被的ELISA板，用洗涤液洗涤3次，洗涤液每次加入300μL/孔，将封闭液恢复室温后，每孔加入封闭液200μL，室温封闭4h后，用PBST洗涤3次且最后一次拍干水分；

4）保护：每孔加入封闭保护液200μL/孔，反应，弃液，拍干净水分；

5）保存。

6.一种如权利要求1所述的猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白的制备方法，其特征在于，包含如下步骤：

1）合成得到编码猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白的基因，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；

2）通过BamHI和XhoI两个酶切位点，将编码猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白的基因克隆到原核表达载体pET-32a(+)，构建重组质粒；

3）将重组质粒转化到BL21大肠杆菌中，得到重组表达菌株；

4）重组表达菌株经IPTG诱导、裂解、离心，取上清和沉淀；用Ni-IDA亲和层析纯化，得到猪繁殖与呼吸综合征病毒重组GP5蛋白。