[发明专利]一种基于数字微滴PCR检测牛传染性鼻气管炎病毒的引物探针组合及其应用在审
| 申请号： | 202310514229.6 | 申请日： | 2023-05-09 |
| 公开（公告）号： | CN116497157A | 公开（公告）日： | 2023-07-28 |
| 发明（设计）人： | 郭利;赵立峰;薛力刚;钟伟;叶京飞;陈强;孙娜;张妍 | 申请（专利权）人： | 吉林农业科技学院 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12N15/11;C12Q1/686;C12R1/93 |
| 代理公司： | 北京卓胜佰达知识产权代理有限公司 16026 | 代理人： | 张串串 |
| 地址： | 132000 吉林省*** | 国省代码： | 吉林;22 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 数字 pcr 检测 传染性 气管炎 病毒 引物 探针 组合 及其 应用 | ||
1.一种基于数字微滴PCR检测牛传染性鼻气管炎病毒的引物组，其特征在于，所述引物组由如SEQ ID NO.1所示的上游引物和如SEQ ID NO.2所示的下游引物组成。
2.一种基于数字微滴PCR检测牛传染性鼻气管炎病毒的探针，其特征在于，所述探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述探针的5'端修饰有发光的报告荧光基团FAM，3'端修饰有荧光淬灭基团BHQ1。
3.一种检测牛传染性鼻气管炎病毒的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的引物组和/或权利要求2所述的探针。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还包括阳性对照品和阴性对照品。
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述阳性对照品为拷贝数为(1.14±0.19)×104copies/μL的牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV-LNM)核酸标准物质；所述阴性对照品为ddH2O。
6.一种非疾病诊断目的的检测牛传染性鼻气管炎病毒的方法，其特征在于，包括：将权利要求1所述的引物组和权利要求2所述的探针、待测样品、酶和反应缓冲液混合，制备数字微滴，然后将微滴转入PCR仪中进行扩增，再使用微滴分析仪检测扩增后的微滴，得到所述待测样品的检测结果，当检测结果≥3.3个拷贝时，判定为阳性。
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述扩增反应的反应体系包括：ddPCRsupermix 10μL、ddH2O 5.7μL、引物1.8μL、模板2μL和荧光探针0.5μL；
反应程序：95℃10min；94℃30秒，55℃60秒，40个循环；98℃10min；12℃60min。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述引物的浓度为900nmol/L；所述探针的浓度为250nmol/L。
9.权利要求1所述的引物组或权利要求2所述的探针在制备检测牛传染性鼻气管炎病毒产品中的应用。
10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述产品包括试剂或者试剂盒。
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