[发明专利]一种胰岛素修饰的肝素衍生物及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种胰岛素修饰的肝素衍生物，其特征在于，肝素糖链还原端的半缩醛羟基与NH₂-PEG_m-COOH的氨基发生缩合反应，胰岛素的氨基与NH₂-PEG_m-COOH的羧基反应形成酰胺键；结构通式如下：

其中，R₁为氢或磺酸基；R₂为氢、乙酰基或磺酸基；R₃为氢或磺酸基；n为1-20之间的任意整数；m为1-12之间的任意整数；x表示与1个胰岛素分子连接的肝素链数量，为1-4之间的任意整数；所述结构式中最右侧酰胺键中的氨基为胰岛素的氨基。

2.一种权利要求1所述的胰岛素修饰的肝素衍生物的制备方法，其特征在于，采用以下步骤：

（1）在肝素钠溶液中加入NaIO₄溶液，搅拌均匀，避光反应，脱盐；加入NaBH₄调节反应溶液的pH，继续搅拌，调节pH，加入乙醇，静置收集沉淀；沉淀复溶后脱盐冻干，得到非抗凝肝素；

（2）将步骤（1）制备的非抗凝肝素、NH₂-PEG_m-COOH和氰基硼氢化钠在水中混合，在50-80℃下反应24-48 h，再加入同等质量的氰基硼氢化钠继续反应24-48 h，反应完成后，脱盐、冻干；

（3）用MES缓冲液将步骤（2）中制备的产物配置成溶液，加入非抗凝肝素5-20倍物质的量的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和20-50倍物质的量的N-羟基琥珀酰亚胺，混合均匀后室温反应；

（4）使用磷酸盐缓冲液溶解胰岛素，按照胰岛素与非抗凝肝素的物质的量之比为1：1-4加入到步骤（3）制备的溶液中，混合均匀后室温反应1-4小时，超滤脱盐、冻干，得到胰岛素修饰的肝素衍生产物。

3. 根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）所述肝素钠溶液为将1.0 g肝素钠溶于5-20 mL纯水中制备得到；所述NaIO₄溶液为25 mL现配的100-200 mmol/L NaIO₄溶液；步骤（1）所述的避光反应为在4℃条件避光反应24 h。

4. 根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中所述加入NaBH₄调节反应溶液的pH为4.0，继续搅拌后调pH为7.0；步骤（1）中加入乙醇为加入无水乙醇调节溶液乙醇体积浓度为70-80%；步骤（1）和（2）所述脱盐均采用1-5 kDa超滤膜离心脱盐。

5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）所述非抗凝肝素、NH₂-PEG_m-COOH和氰基硼氢化钠的质量比1：1-3：2-6。

6. 根据权利要求2所述制备方法，其特征在于，步骤（3）所述MES缓冲液的浓度0.05-0.2 mol/L。

7.一种权利要求1所述的胰岛素修饰的肝素衍生物或权利要求2-6任一项所述制备方法制备的胰岛素修饰的肝素衍生物的应用，其特征在于，所述胰岛素修饰的肝素衍生产物在制备治疗糖尿病合并帕金森病食品或药物中的应用。

8.根据权利要求7所述的胰岛素修饰的肝素衍生物的应用，其特征在于：以胰岛素修饰的肝素衍生物为活性成分，与药学或食品上可接受的辅料或辅助添加剂成分混合后，按照常规制剂方法，用来制备治疗糖尿病合并帕金森病的食品或药物。