[发明专利]乳源性复合益生菌胞外多糖及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及功能微生物筛选与应用技术领域，是一种乳源性复合益生菌胞外多糖及其制备方法和应用，将含有马乳酒样乳杆菌、戊糖乳杆菌和高加索酸奶乳杆菌冻干粉活化培养后接种于培养基中进行发酵、离心、蒸发浓缩，加入液态三氯乙酸搅拌得到混合液后，与无水乙醇混合，经冻干机冷冻干燥，得到乳源性复合益生菌胞外多糖。本发明乳源性复合益生菌胞外多糖产量对Raw264.7巨噬细胞具有良好的促增殖作用，且与抗癌药物5‑氟尿嘧啶联用时，可显著降低5‑氟尿嘧啶的细胞毒性，还能提高Raw264.7巨噬细胞对CT‑26结肠癌细胞的抑制作用。

技术领域

本发明涉及功能微生物筛选与应用技术领域，是一种乳源性复合益生菌胞外多糖及其制备方法和应用。

背景技术

结肠癌（colorectal cancer简称CRC）是发病率和病死率均较高的消化道恶性肿瘤。据国际癌症研究协会（IARC）公布的2021年世界肿瘤发病率和病死率数据表明，CRC在全球发病率排行第三，致死率位列全球第二，在我国也呈现相同趋势。

结肠癌的发生及发展是多因素、多阶段、多环节共同参与的复杂过程，在这一过程中，结肠癌细胞以及周围环境共同形成了特殊的的肿瘤微环境（tumour microenvironment简称TME），TME中的多种成分与结肠癌细胞相互作用、协同进化，进而促进结肠癌的发展。现阶段临床治疗结肠癌的经典方法主要包括手术切除、内科化疗、综合放疗和免疫疗法等。众所周知，化疗和放疗在机体内杀死癌细胞的同时，还会损害（杀伤）正常细胞及免疫细胞，进而导致多种组织及器官损伤,特别是化学合成抗癌药物会引起机体骨髓抑制、降低免疫力、肝肾损伤和心脏毒性等严重的副作用。

免疫治疗做为2013全球十大科学突破评选的首位，被认为是目前临床上经典疗法之后出现的一种新兴且最具有前景的治疗方法。然而许多临床研究也证实了一部分肿瘤患者依然对免疫治疗不敏感、缺乏靶向性、导致机体免疫耐受等一系列问题，继而降低了肿瘤治疗的疗效。因此，寻找安全有效并能提高肿瘤患者生活质量的药物是非常必要的。

随着科学的发展，人们逐渐认识到对TME的靶向及重塑可能是免疫治疗的一个新靶点。由于肠道菌群在塑造自生系统性免疫功能中起到关键的作用，故可以通过改变肠道菌群的组成影响宿主对免疫治疗的反应。

益生菌（包括乳酸菌即MRS）一直以来被认为是以肠道做为主要作用靶点从而调控及预防各类疾病发生的物质。益生菌是在数量充足时能够给宿主带来有益影响的活性微生物。它们通过调节肠道内菌群平衡或者调节宿主黏膜与系统免疫功能，促进营养吸收、保持肠道健康，从而产生有益作用的单微生物或组成明确的混合微生物。传统的观念认为只有活的益生菌才能发挥其益生作用，但是越来越多的研究表明细菌所产生的代谢物在其中也扮演着不可忽略的作用。

胞外多糖（Exopolysaccharides简称EPS）是由一些特殊微生物（包括藻类、细菌、真菌等）在生长代谢过程中分泌到细胞壁外的次级代谢物。随着研究的深入，人们发现其在抗氧化、抗炎、抗肿瘤等生物活性功能研究方面也有着出色的潜力。并且EPS作为益生菌的代谢产物，在菌体发挥功能的过程中也起着重要作用。

发明内容

本发明提供了一种乳源性复合益生菌胞外多糖及其制备方法和应用，克服了上述现有技术之不足，其对Raw264.7巨噬细胞具有良好的促增殖作用，且与抗癌药物5-氟尿嘧啶联用时，可显著降低5-氟尿嘧啶的细胞毒性，还能提高Raw264.7巨噬细胞对CT-26结肠癌细胞的抑制作用。