[发明专利]乳源性复合益生菌胞外多糖及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种乳源性复合益生菌胞外多糖，其特征在于按照下述方法制备得到：第一步，将含有马乳酒样乳杆菌、戊糖乳杆菌和高加索酸奶乳杆菌冻干粉活化后接种于培养基中进行发酵，得到发酵液；第二步，将发酵液在4℃、10000rmp条件下离心10min，弃去沉淀，保留上清液；第三步，将上清液蒸发浓缩至原体积的1/5后，加入800mg/mL的液态三氯乙酸至终浓度为4g/100mL,在室温条件下磁力搅拌，得到糖溶液；第四步，将所得的糖溶液在4℃、10000rpm条件下离心15min，收集得到上清液；第五步，向所得上清液中加入2倍至3倍体积的无水乙醇，4℃条件下静置，使胞外多糖完全沉淀；第六步，胞外多糖沉淀结束后，在4℃、1000xg条件下离心20min冷冻离心，弃去上清液，收集多糖沉淀，并将得到的多糖沉淀溶于适量的超纯水后，分装到透析袋中，4℃超纯水透析3天，每隔4h更换一次水；第七步，将透析的糖液倒入平板玻璃皿中，冷冻干燥后，得到乳源性复合益生菌胞外多糖。

2.根据权利要求1所述的乳源性复合益生菌胞外多糖，其特征在于第一步中，马乳酒样乳杆菌、戊糖乳杆菌和高加索酸奶乳杆菌的质量比为1:1:1。

3.根据权利要求1或2所述的乳源性复合益生菌胞外多糖，其特征在于第三步中，磁力搅拌时间为30min；或/和，第五步和第七步中，静置和冷冻干燥的时间均为24小时。

4.一种乳源性复合益生菌胞外多糖的制备方法，其特征在于按照下述方法进行：第一步，将含有马乳酒样乳杆菌、戊糖乳杆菌和高加索酸奶乳杆菌冻干粉活化后接种于培养基中进行发酵，得到发酵液；第二步，将发酵液在4℃、10000rmp条件下离心10min，弃去沉淀，保留上清液；第三步，将上清液蒸发浓缩至原体积的1/5后，加入800mg/mL的液态三氯乙酸至终浓度为4g/100mL,在室温条件下磁力搅拌30min，得到糖溶液；第四步，将所得的糖溶液在4℃、10000rpm条件下离心15min，收集得到上清液；第五步，向所得上清液中加入2倍至3倍体积的无水乙醇，4℃条件下静置，使胞外多糖完全沉淀；第六步，胞外多糖沉淀结束后，在4℃、1000xg条件下离心20min冷冻离心，弃去上清液，收集多糖沉淀，并将得到的多糖沉淀溶于适量的超纯水后，分装到透析袋中，4℃超纯水透析3天，每隔4h更换一次水；第七步，将透析的糖液倒入平板玻璃皿中，冷冻干燥后，得到乳源性复合益生菌胞外多糖。

5.根据权利要求4所述的乳源性复合益生菌胞外多糖的制备方法，其特征在于第一步中，马乳酒样乳杆菌、戊糖乳杆菌和高加索酸奶乳杆菌的质量比为1:1:1。

6.根据权利要求4或5所述的乳源性复合益生菌胞外多糖，其特征在于第三步中，磁力搅拌时间为30min；或/和，第五步和第七步中，静置和冷冻干燥的时间均为24小时。

7.一种根据权利要求1或2或3所述的乳源性复合益生菌胞外多糖在制备增强机体抗肿瘤免疫功能辅助制剂方面的应用。

8.根据权利要求7所述的乳源性复合益生菌胞外多糖在制备增强机体抗肿瘤免疫功能辅助制剂的应用，其特征在于乳源性复合益生菌胞外多糖对Raw264.7巨噬细胞具有增殖作用，乳源性复合益生菌胞外多糖能提高Raw264.7巨噬细胞对CT-26结肠癌细胞的抑制作用，乳源性复合益生菌胞外多糖与抗肿瘤药物5-氟尿嘧啶联用，能降低5-氟尿嘧啶的细胞毒性。