[发明专利]一种检测依诺肝素钠肝素酶II酶解组分的方法

说明书

本发明提供了一种检测依诺肝素钠肝素酶II酶解组分的方法，属于肝素技术领域。所述方法包括如下步骤：1)将待检测肝素样品进行酶解，得到待检测肝素酶解液；2)采用液相色谱检测待检测肝素酶解液的组分含量；采用液相色谱进行检测时，使用流动相A和流动相B进行梯度洗脱；所述流动相A为116.88g/L的氯化钠水溶液；所述流动相B为5.844g/L的氯化钠水溶液；3)计算相对峰面积大于1％的组分含量。本发明提供的方法灵敏度高，分离度好，能够有效改善保留时间前移现象。

技术领域

本发明属于肝素技术领域，尤其涉及一种检测依诺肝素钠肝素酶II酶解组分的方法。

背景技术

肝素在临床上作为一种抗凝、抗血栓药物使用。目前肝素是世界上最有效和临床用量最大的抗凝血药物，主要应用于心脑血管疾病和血液透析治疗，其中，其在血液透析治疗中是唯一有效的特效药物。依诺肝素钠是由肝素原料药作为原料进一步加工成的一大类抗血栓的药物，具有更为广泛的临床医学用，成为治疗急性静脉血栓和急性冠脉综合症(心绞痛、心肌梗塞)等疾病的首选药物，并且安全性更高，副作用更小。

依诺肝素钠肝素酶II酶解，肝素酶II有更广的特异性，能降解少量肝素和硫酸乙酰肝素的含2-O-硫酸化和2-OH的糖醛酸糖苷键，为了解依诺肝素钠内部结构提供数据。但现有技术中采用液相色谱进行检测时，由于依诺肝素钠肝素酶II酶解产物分子量小，且成分多，分离度不好，且多次检测时保留时间会出现前移现象，影响检测灵敏度。

发明内容

本发明提供了一种检测依诺肝素钠肝素酶II酶解组分的方法，灵敏度高，分离度好。

为了达到上述目的，本发明提供了一种检测依诺肝素钠肝素酶II酶解组分的方法，包括如下步骤：

1)将待检测肝素样品进行酶解，得到待检测肝素酶解液；

2)采用液相色谱检测待检测肝素酶解液的组分含量；

采用液相色谱进行检测时，使用流动相A和流动相B进行梯度洗脱；所述流动相A为116.88g/L的氯化钠水溶液；所述流动相B为5.844g/L的氯化钠水溶液；

3)计算相对峰面积大于1％的组分含量。

优选的，步骤2)中进行梯度洗脱时的过程如下：