[发明专利]六味地黄丸（异型小蜜丸）指纹图谱检测方法和应用

说明书

本发明涉及六味地黄丸(异型小蜜丸)指纹图谱检测方法和应用。所述方法采用如下色谱条件对六味地黄丸(异型小蜜丸)供试品溶液进行检测：色谱柱：Agilent TC C18，5μm，4.6mm×250mm；柱温：35℃；流速：1.0ml/min；检测波长：240nm；进样量：10μL；流动相：流动相A为0.5％磷酸水溶液，流动相B为乙腈；梯度洗脱条件如下：0‑9min，97％A，3％B；9‑10min，97％～94％A，3％～6％B；10‑30min，94％～86％A，6％～14％B；30‑45min，86％A，14％B；45‑85min，86％～66％A，14～45％B；85‑88min，55％～5％A，45％～95％B。所述方法可以用于六味地黄丸(异型小蜜丸)的质控。

技术领域

本发明属于六味地黄丸(异型小蜜丸)质量分析技术领域，涉及一种检测六味地黄丸(异型小蜜丸)指纹图谱的液相色谱方法、包含该方法的建立对照指纹图谱的方法和应用。

背景技术

六味地黄丸(异型小蜜丸)是厦门中药厂的独家品种，获得全国中成药优质产品银奖，是由熟地黄、山茱萸(制)、牡丹皮、山药、茯苓、泽泻、蜂蜜(炼)制成的中成药，具有滋阴补肾，用于治疗肾阴亏损、头晕耳鸣、腰膝酸软、骨蒸潮热盗汗、遗精等的功效。

目前对于六味地黄丸(异型小蜜丸)中活性成分含量测定指标较为单一，无法反应真实内在质量。为了全面而有效的控制六味地黄丸(异型小蜜丸)的内在质量，确保产品质量稳定均一，需开展新的六味地黄丸(异型小蜜丸)的质量检测方法，对药品的可持续性发展具有重要意义。

发明内容

现有技术中已经存在一些关于六味地黄丸HPLC指纹图谱的研究，例如，王喜军等，六味地黄丸指纹图谱的研究，中国中药杂质，2004,29(10):1004-1005；耿丽等，六味地黄丸HPLC指纹图谱建立及主要成分分析，世界中医药,2019,14(11):2875-2878；赵洪芝等，六味地黄丸的HPLC指纹图谱和模式识别研究，中草药,2010,41(01)：48-51。但是，这些研究针对的六味地黄丸在组成和制备方法上不同于厦门中药厂的六味地黄丸(异型小蜜丸)，因而其研究结果不能用于六味地黄丸(异型小蜜丸)。

为了更全面有效控制六味地黄丸(异型小蜜丸)的质量，本发明人通过对提取溶剂、提取方式等进行研究得到了制备供试品溶液的方法，然后采用高效液相色谱(HPLC)法并通过对检测波长、流动相、柱温等条件进行研究，同时对专属性、精密度、稳定性等进行验证，得到了一种检测六味地黄丸(异型小蜜丸)指纹图谱的高效液相色谱方法，并由该方法建立了六味地黄丸(异型小蜜丸)的质量控制方法，由此完成了本发明。

本发明一方面提供了一种检测六味地黄丸(异型小蜜丸)指纹图谱的液相色谱方法，其采用如下色谱条件对六味地黄丸(异型小蜜丸)供试品溶液进行检测：

色谱柱：Agilent TC C18，5μm，4.6mm×250mm，

柱温：35℃

流速：1.0ml/min

检测波长：240nm

进样量：10μL

流动相：流动相A为0.5％磷酸水溶液，流动相B为乙腈

梯度洗脱条件如下：

0-9min，97％A，3％ B；

9-10min，97％～94％A，3％～6％ B；

10-30min，94％～86％A，6％～14％ B；

30-45min，86％A，14％ B；

45-85min，86％～66％A，14～45％ B；

85-88min，55％～5％A，45％～95％ B。