[发明专利]六味地黄丸（异型小蜜丸）指纹图谱检测方法和应用

权利要求书

1.一种检测六味地黄丸(异型小蜜丸)指纹图谱的液相色谱方法，其采用如下色谱条件对六味地黄丸(异型小蜜丸)供试品溶液进行检测：

色谱柱：Agilent TC C18，5μm，4.6mm×250mm

柱温：35℃

流速：1.0ml/min

检测波长：240nm

进样量：10μL

流动相：流动相A为0.5％磷酸水溶液，流动相B为乙腈

梯度洗脱条件如下：

0-9min，97％A，3％B；

9-10min，97％～94％A，3％～6％B；

10-30min，94％～86％A，6％～14％B；

30-45min，86％A，14％B；

45-85min，86％～66％A，14～45％B；

85-88min，55％～5％A，45％～95％B。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述供试品溶液如下配制：取六味地黄丸(异型小蜜丸)供试品以25倍的液固比用甲醇提取，液固比单位为体积/质量，ml/g；

优选地，提取方式为超声提取，提取时间为30分钟以上。

3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述供试品溶液如下配制：取六味地黄丸(异型小蜜丸)供试品，精密称定，以25倍的液固比，单位为ml/g，精密移入甲醇，称定质量，超声处理30min，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得六味地黄丸(异型小蜜丸)供试品溶液。

4.一种建立六味地黄丸(异型小蜜丸)对照指纹图谱的方法，所述方法包括：

(1)供试品溶液配制：

取六味地黄丸(异型小蜜丸)供试品以25倍的液固比用甲醇提取，液固比单位为体积/质量，ml/g，得到供试品溶液；

(2)对照品溶液配制：

称取5-羟甲基糠醛对照品3.502mg，置100mL量瓶中，加甲醇使溶解，定容至刻度，制成0.035mg/ml的对照品溶液；

精密称取莫诺苷对照品2.910mg、马钱苷对照品3.056mg、芍药苷对照品7.768mg、丹皮酚对照品4.903mg，置50mL量瓶中，加甲醇使溶解，定容至刻度，摇匀，即得混合对照品溶液；

(3)HPLC检测：

分别精密吸取上述供试品溶液和对照品溶液各10μL，用根据权利要求1的方法检测得到供试品指纹色谱图；

(4)生成对照指纹图谱：

基于n批供试品的指纹色谱图中的共有峰生成对照指纹图谱，其中，选择六味地黄丸(异型小蜜丸)中主要成分且分离度较好的色谱峰作为特征峰，确定21个共有峰，所述n≥10；

(5)共有峰的鉴定及归属：

对六味地黄丸(异型小蜜丸)指纹图谱中的共有峰进行归属及鉴定。

5.根据权利要求4所述的方法，其中，在步骤(1)中，提取方式为超声提取，提取时间为30分钟以上。

6.根据权利要求4所述的方法，其中，步骤(1)如下进行：取六味地黄丸(异型小蜜丸)供试品，精密称定，以25倍的液固比，单位为ml/g，精密移入甲醇，称定质量，超声处理30min，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得六味地黄丸(异型小蜜丸)供试品溶液。

7.根据权利要求4所述的方法，其中，六味地黄丸(异型小蜜丸)的对照指纹图谱大体上如图8所示。